ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ ...................................................................................................................... 5
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ .............................................................................. 16
1.1 Наноматериалы в иммунодиагностике: понятие о наноматериалах ......... 16
1.2 Многообразие наночастиц, использующихся в иммуноанализах ............. 19
1.3 Колориметрические иммуноанализы ............................................................ 20
1.4 ЯМР-иммуноанализы на основе магнитных наночастиц ........................... 27
1.5 Наночастицы в иммунотерапии и иммунодиагностике: примеры
коммерциализации ................................................................................................ 30
1.6 Свойства и особенности альбумина, желатина и казеина .......................... 34
1.7 Применение использование белковых молекул для синтеза и
стабилизации наноматериалов ............................................................................. 38
1.8 Синтез белковых наночастиц методом десольватации ............................... 40
1.9 Применение наночастиц, синтезированных методом десольватации в in
vitro диагностике ................................................................................................... 43
1.10 Метод динамического рассеяния света ....................................................... 46
1.11 Оценка морфологии, кристаллической структуры и элементного состава
наночастиц ............................................................................................................. 48
1.12 Измерение удельной поверхности наночастиц .......................................... 50
1.13 Перспективы разработки и применения диагностических реагентов на
основе белковых наночастиц ............................................................................... 51
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ .................................... 54
2.1 Синтез диагностических реагентов для ЯМР-иммуноанализа .................. 54
2.2 Синтез диагностичеких реагентов на основе белковых наночастиц ......... 62
2.3 Синтез диагностических реагентов на основе белковых наночастиц,
нагруженных гемином .......................................................................................... 74
2.4 Синтез диагностичеких реагентов на основе белковых наночастиц,
нагруженных берлинской лазурью ...................................................................... 79
2.5 Синтез диагностических реагентов на основе нанозимов «искусственная
пероксидаза» .......................................................................................................... 85
3
ГЛАВА 3. ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ РЕАГЕНТЫ ДЛЯ ЯМР-ИММУНОАНАЛИЗА
НА ОСНОВЕ МАГНИТНЫХ НАНОЧАСТИЦ, ПОКРЫТЫХ РАЗЛИЧНЫМИ
БЕЛКАМИ ...................................................................................................................... 96
3.1 Оптимизация иммунодиагностикумов на основе магнитных наночастиц 96
3.2 ЯМР-иммуноананализ противостолбнячных антител .............................. 118
ГЛАВА 4. НОВЫЕ ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ К СИНТЕЗУ И
КОНТРОЛЮ КАЧЕСТВА БЕЛКОВЫХ НАНОЧАСТИЦ ..................................... 126
4.1 Технологические сложности, возникающие при получении препаратов
белковых наночастиц .......................................................................................... 127
4.2 Воспроизводимость метода десольватации................................................ 132
4.3 Характеризация белковых наночастиц, синтезированных методом
десольватации ...................................................................................................... 137
4.4 Стандартизация препаратов белковых наночастиц: сравнение оценки
методов определения их концентрации ............................................................ 145
4.5 Оптимизация синтеза желатиновых наночастиц методом десольватации
............................................................................................................................... 162
4.6 Синтез наночастиц из различных желатинов в масштабе сотен
миллиграммов ...................................................................................................... 173
4.7 Контроль качества препаратов желатиновых наночастиц ........................ 180
4.8 Инкапсулирование модельной флуоресцентной метки в желатиновые
наночастицы ......................................................................................................... 184
4.9 Стерилизация наночастиц желатина ........................................................... 187
4.10 Влияние наночастиц желатина на жизнеспособность мононуклеарных
клеток периферической крови ........................................................................... 191
ГЛАВА 5. КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИЙ ИММУНОАНАЛИЗ
ИММУНОГЛОБУЛИНОВ ПРИ ПОМОЩИ АЛЬБУМИНОВЫХ НАНОЧАСТИЦ,
СОДЕРЖАЩИХ ГЕМИН ........................................................................................... 195
5.1 Оптимизация диагностикумов на основе наночастиц БСА/гемин .......... 197
5.2 Колориметрический иммуноанализ проивостолбнячных антител при
помощи наночастиц БСА/гемин ........................................................................ 206
ГЛАВА 6. ДИАГНОСТИКУМЫ НА ОСНОВЕ НАНОЗИМОВ БЕРЛИНСКОЙ
ЛАЗУРИ, ИНКАПСУЛИРОВАННЫХ В АЛЬБУМИНОВЫЕ НАНОЧАСТИЦЫ
....................................................................................................................................... 213
6.1 Получение дианостикумов на основе альбуминовых наночастиц,
содержащих берлинскую лазурь ....................................................................... 216
4
6.2 Колориметрический иммуноанализ простатспецифического антигена .. 222
ГЛАВА 7. ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ РЕАГЕНТЫ НА ОСНОВЕ НАНОЧАСТИЦ
«ИСКУССТВЕННАЯ ПЕРОКСИДАЗА», МОДИФИЦИРОВАННЫХ
ЖЕЛАТИНОМ ............................................................................................................. 230
7.1 Разработка и оптимизация дианостикумов на основе наночастиц
берлинской лазури, покрытых желатином ....................................................... 232
7.2 Применение наночастиц берлинской лазури, покрытых желатином, в
иммуноанализе противостолбнячных антител и ПСА .................................... 246
ЗАКЛЮЧЕНИЕ ........................................................................................................... 252
ВЫВОДЫ ..................................................................................................................... 258
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ..................................................................... 260
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ......................................................................................... 261
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ........................................................................................... 262
