ВВЕДЕНИЕ………………………………………………………………. 4
ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ………………………………………... 18
1.1 Значение сохранения репродуктивных клеток птиц………… 18
1.2 Сохранение женских гамет……………………………………. 20
1.3 Сохранение эмбриональных клеток…………………………... 21
1.4 Сохранение семени. Используемые технологи
замораживания семени………………………………………… 23
1.5 Методы оценки качества семени……………………………… 25
1.6 Проблемы криоконсервации семени сельскохозяйственных
птиц……………………………………………………………… 27
1.7 Криопротекторы. Криопротекторные свойства сахаридов….. 33
1.8 Криобанки и их вклад в сохранение генетического
разнообразия …………………………………………………… 38
1.19 Лиофилизация репродуктивных клеток самцов …………….. 41
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ……………. 46
2.1 Схема исследования……………………………………………. 46
2.2 Содержание экспериментального поголовья. Получение
семени петухов…………………………………………………. 48
2.3 Состав среды для криоконсервации семени петухов ……….. 49
2.4 Протокол замораживания и оттаивания семени петухов……. 49
2.5 Оценка подвижности нативного и заморожено/оттаянного
семени петухов…………………………………………………. 50
2.6 Искусственное осеменение кур для оценки
функциональности заморожено/оттаянных сперматозоидов
петухов………………………………………………………….. 50
2.7 Оценка продолжительности функциональной
полноценности заморожено/оттаянных сперматозоидов
петухов в половых путях курицы……………………………... 53
2.8 Оценка жизнеспособности сперматозоидов петухов………... 54
2.9 Оценка сохранности хроматина сперматозоидов петухов….. 54
2.10 Количественный хроматографический анализ углеводов и
полиолов цитозоля сперматозоидов …………………………. 55
Статистический анализ………………………………………… 56
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ…………………………... 57
3.1. Модификация метода оценки функциональной
полноценности сперматозоидов in vitro………………………. 57
3.2. Разработка и оценка эффективности криопротекторной
среды с содержанием невосстанавливающего дисахарида
трегалоза в протоколе замораживания/оттаивания семени
петухов………………………………………………………….. 61
3
3.2.1. Разработка составов новых криозащитных разбавителей для
семени петухов на основе комбинации моно- и
дисахаридов и анализ их физико-химических параметров….. 61
3.2.2. Разработка и оценка эффективности криопротекторной
среды с содержанием невосстанавливающего дисахарида
трегалоза в протоколе замораживания/оттаивания семени
петухов………………………………………………………….. 62
3.3. Разработка и оценка эффективности криопротекторной
среды с содержанием восстанавливающего дисахарида
мальтоза в протоколе замораживания/оттаивания семени
петухов………………………………………………………….. 67
3.4. Верификация состава криопротекторной среды, содержащей
восстанавливающий и невосстанавливающий дисахариды в
комбинации с моносахаридом в протоколе
замораживания/оттаивания семени петухов на связи с его
фертильностью…………………………………………………. 74
3.4.1 Результаты хроматографического анализа содержания
углеводов и полиолов в цитозоле заморожено/оттаянных
сперматозоидов при использовании восстанавливающего
или невосстанавливающего дисахаридов в составе
криопротекторного разбавителя………………………………. 79
3.5. Разработка методов поддержания биостаза сперматозоидов
петухов в состоянии ангидробиоза……………………………. 82
Глава 4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ ………………………………………………... 92
Выводы…...………………………………………………………………. 101
Практические предложения…………………………………………….. 103
Перспективы дальнейшей разработки темы…………………………… 103
Список сокращений и условных обозначений………………………… 104
Список использованной литературы…………………………………… 105
Приложение 1……………………………………………………………. 130
Приложение 2……………………………………………………………. 141
