Оглавление
ВВЕДЕНИЕ .................................................................................................................... 6
ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ............................................................................. 14
1.1 Механизмы действия ионизирующего излучения на организм .................... 14
1.2 Лучевая терапия и влияние ионизирующего излучения
на опухолевый рост .................................................................................................. 15
1.3 Теоретические подходы к химической модификации
лучевого воздействия ............................................................................................... 16
1.4 Современные подходы к радиосенсибилизации
при лучевом воздействии ........................................................................................ 17
1.5 Биологические эффекты гамма-лактон 2,3-дегидро-L-гулоновой кислоты и
перспективы применения при лучевом воздействии ........................................... 18
1.6 Биологические эффекты лития и перспективы применения при лучевом
воздействии ............................................................................................................... 20
1.7 Механизмы действия литиевой соли гамма-лактон
2,3-дегидро-L-гулоновой кислоты в качестве радиосенсибилизатора .............. 21
1.8 Современные методы и подходы к анализу субстанций,
содержащих литий и гамма-лактон 2,3-дегидро-L-гулоновую кислоту ............ 22
ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ................................... 26
2.1 Синтез соединения ............................................................................................. 26
2.2 Методы физико-химической оценки изучаемого соединения ...................... 26
2.3 Методика количественного определения стандартизуемой
фармацевтической субстанции ............................................................................... 29
2.4 Методика количественного определения лития ............................................. 30
2.5 Характеристика биологических объектов исследования ............................... 31
2.5.1 Клеточные линии ......................................................................................... 31
2.5.2 Экспериментальные животные................................................................... 32
3
2.6 Методы и характеристики лучевого воздействия .......................................... 32
2.7 Изучение механизмов действия субстанции in silico ..................................... 32
2.8 Оценка жизнеспособности клеточных культур………………………………32
2.8.1 МТТ-тест ....................................................................................................... 33
2.8.2 Реакция бластной трансформации лимфоцитов ....................................... 34
2.8.3 Проточная цитофлуориметрия ................................................................... 34
2.9 Исследование клеточной гибели (вариантов апоптоза) клеточных культур35
2.10 Оценка окислительного стресса ..................................................................... 35
2.11 Оценка формирования клеточных колоний .................................................. 35
2.12 Оценка количества двунитиевых разрывов ДНК ......................................... 36
2.13 Получение трехмерной модели опухоли in vitro .......................................... 36
2.14 Характеристика и схема экспериментов на животных ................................ 37
2.15 Методы оценки физиологических, биохимических параметров
и опухолевого роста экспериментальных животных ........................................... 38
2.16 Статистическая обработка данных ................................................................. 38
ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ ......................................................... 40
3.1 Получение исследуемого соединения .............................................................. 40
3.1.1 Методика синтеза ......................................................................................... 41
3.2 Результаты исследования механизмов действия литиевой соли гамма-лактон
2,3-дегидро-L-гулоновой кислоты in silico ............................................................ 42
3.3 Результаты исследования радиосенсибилизирующих свойств
литиевой соли гамма-лактон 2,3-дегидро-L-гулоновой кислоты на клеточных
культурах in vitro ...................................................................................................... 47
3.3.1 Результаты оценки токсичности исследуемого соединения ................... 47
3.3.2 Результаты оценки жизнеспособности адгезивных клеточных культур
после воздействия исследуемого соединения и ионизирующего излучения . 48
4
3.3.3 Результаты оценки апоптоза и жизнеспособности клеток после
воздействия субстанции и ионизирующего излучения ................................... 54
3.3.4 Результаты оценки окислительного стресса ............................................. 57
3.3.5 Результаты оценки формирования клеточных колоний .......................... 58
3.3.6 Результаты определения двойных разрывов ДНК
в клеточной культуре ............................................................................................ 59
3.3.7 Результаты оценки формирования трехмерной клеточной культуры.... 62
3.4 Результаты исследования радиосенсибилизирующих свойств
литиевой соли гамма-лактон 2,3-дегидро-L-гулоновой кислоты при лучевом
воздействии на животных моделях опухолевого роста in vivo ........................... 64
3.5 Разработка и валидация методик стандартизации фармацевтической
субстанции ................................................................................................................ 70
3.5.1 Разработка методики количественного определения литиевой соли
гамма-лактон 2,3-дегидро-L-гулоновой кислоты .............................................. 70
3.5.2 Валидация методики количественного определения ............................... 78
3.5.3 Валидация методики количественного определения лития .................... 82
3.5.4 Валидация методики определения остаточных органических
растворителей ........................................................................................................ 86
3.6 Определение показателей качества и разработка проекта нормативной
документации ........................................................................................................... 90
3.6.1 Установление норм качества. Оценка физико-химических
характеристик ........................................................................................................ 90
3.6.2 Определение родственных примесей в субстанции ................................. 92
3.6.3 Определение оптических свойств .............................................................. 93
3.6.4 Определение рефрактометрических показателей..................................... 93
3.6.5 Количественное определение ..................................................................... 93
3.6.6 Инфракрасная спектрометрия .................................................................... 94
3.6.7 УФ- спектрофотометрия ............................................................................. 95
3.6.8 Микробиологическая чистота ..................................................................... 95
5
ГЛАВА 4 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ .......................... 97
ЗАКЛЮЧЕНИЕ ......................................................................................................... 102
ВЫВОДЫ ................................................................................................................... 104
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ, ТЕРМИНОВ ....... 106
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ......................................................................................... 108
ПРИЛОЖЕНИЕ А Патент на изобретение ............................................................. 127
ПРИЛОЖЕНИЕ Б Проект нормативной документации ....................................... 128
ПРИЛОЖЕНИЕ В Акт внедрения результатов в учебный процесс .................... 137
ПРИЛОЖЕНИЕ Г Акт внедрения результатов в учебный процесс ..................... 138
ПРИЛОЖЕНИЕ Д Заключение комиссии по контролю
содержания и использования лабораторных животных ...................................... 139
ПРИЛОЖЕНИЕ Е Паспорт стандартного образца ................................................ 140
