ОГЛАВЛЕНИЕ
ОГЛАВЛЕНИЕ ...................................................................................................................................2
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ......................................................5
ВВЕДЕНИЕ .........................................................................................................................................7
Актуальность темы диссертационного исследования .....................................................................7
Степень разработанности темы ..........................................................................................................8
Цель исследования ..............................................................................................................................9
Задачи, решаемые в ходе исследования: ...........................................................................................9
Научная новизна ................................................................................................................................10
Теоретическая и практическая значимость работы .......................................................................10
Методология и методы исследования .............................................................................................11
Положения, выносимые на защиту ..................................................................................................11
Степень достоверности результатов ................................................................................................12
Апробация результатов .....................................................................................................................12
Соответствие диссертации паспорту научной специальности .....................................................13
Личный вклад автора в проведение исследования .........................................................................13
Публикации ........................................................................................................................................14
Структура и объем диссертации ......................................................................................................14
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ..................................................................................................15
1.1 Клиническая и генетическая характеристика наследственных множественных
остеохондром .....................................................................................................................................15
1.1.1 Первые описания заболевания ............................................................................................ 15
1.1.2 Эпидемиология заболевания ............................................................................................... 16
1.1.3 Клинические особенности множественных остеохондром ............................................. 17
1.1.4 Инструментальная диагностика ......................................................................................... 20
1.1.5 Пенетрантность и экспрессивность клинических проявлений наследственных
множественных остеохондром .................................................................................................... 20
1.1.6 Риск малигнизации .............................................................................................................. 21
1.1.7 Лечение ................................................................................................................................. 22
1.2 История открытия причины заболевания .................................................................................22
1.3 Структура и функция генов ЕХТ1/2 ...........................................................................................23
1.3.1 Молекулярно-генетическая причина ОХ у других видов ................................................ 26
3
1.4 Методы молекулярно-генетической диагностики ...................................................................27
1.5 Другие фенотипы при вариантах в генах EXT1 и EXT2 ...........................................................28
1.6 Метахондроматоз.........................................................................................................................30
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ..........................................................................................32
2.1 Критерии включения в исследование и критерии исключения ..............................................32
2.2 Описание исследуемой когорты больных с МО и МХ ............................................................32
2.3 Клиническая шкала .....................................................................................................................32
2.4 Выделение нуклеиновых кислот ................................................................................................34
2.5 Номенклатура записи вариантов ................................................................................................35
2.6 Секвенирование по Сэнгеру .......................................................................................................35
2.7 Панельное высокопроизводительное секвенирование ...........................................................35
2.8 Количественная мультиплексная лигазо-зависимая амплификация проб (MLPA) ..............36
2.9 РНК-анализ генов EXT1/2 ..........................................................................................................36
2.9.1 Система РНК-анализа гена EXT1 ....................................................................................... 37
2.9.2 Система РНК-анализа гена EXT2 ....................................................................................... 38
2.10 Секвенирование полного генома .............................................................................................39
2.11 Биоинформатический анализ ...................................................................................................39
2.12 Семейный анализ .......................................................................................................................40
2.13 Статистический анализ .............................................................................................................40
ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ ................................................................................41
3.1 Молекулярно-генетический анализ исследуемой когорты .....................................................41
3.1.1 Результаты молекулярно-генетических исследований .................................................... 41
3.1.2 Поиск причины заболевания в группе больных с отрицательными результатами ДНК
диагностики ................................................................................................................................... 48
3.1.3 Ранее не описанные в литературе варианты в генах EXT1/2 ........................................... 61
3.1.4. Оценка эффективности молекулярно-генетического анализа с использованием
различных методов диагностики ................................................................................................. 65
3.2 Локализации и распределение вариантов нуклеотидной последовательности в генах
EXT1/2 .................................................................................................................................................69
3.2.1 Распределение вариантов нуклеотидной последовательности в генах EXT1/2 у
пациентов с МО ............................................................................................................................. 69
3.2.2 Аномалия локализации вариантов в гене EXT2 ................................................................ 71
3.3 Анализ клинических данных исследуемой когорты ................................................................76
4
3.3.1 Выбор клинической шкалы для анализа ............................................................................ 76
3.3.2 Анализ возраста пробандов в группах с различными генетическими причинами
болезни ........................................................................................................................................... 79
3.3.3 Анализ прогрессии заболевания с возрастом .................................................................... 80
3.3.4 Сравнение тяжести течения у пациентов разного пола ................................................... 80
3.3.5 Оценка тяжести заболевания в зависимости от типа выявленного варианта ................ 81
3.3.6 Анализ возраста обнаружения первого образования ....................................................... 82
3.3.7 Анализ локализации первого образования в зависимости от причины заболевания ... 86
3.3.8 Внескелетные клинические проявления ............................................................................ 88
3.3.9 Оценка частоты малигнизации ........................................................................................... 92
3.3.10 Клинический спектр множественных остеохондром и метахондроматоза ................. 93
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.................................................................................................................................97
ВЫВОДЫ ..........................................................................................................................................99
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ........................................................................................100
СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ ...........................................................101
Список статей, опубликованных в журналах, рекомендованных ВАК при Минобрнауки
России ...............................................................................................................................................101
Список публикаций в других изданиях .........................................................................................101
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ..............................................................................................................102
ПРИЛОЖЕНИЯ ..............................................................................................................................119
Приложение А. Хромосомные координаты ампликонов МПС панелей, использованных в
исследовании ....................................................................................................................................119
Приложение Б. Хромосомная позиция и последовательность праймеров, использованных в
исследовании экзонов генов EXT1/2 ..............................................................................................122
Приложение В. Результаты проведенных молекулярно-генетических исследований .............126
Приложение Г. Клинические данные пробандов из 244 неродственных семей .......................141
БЛАГОДАРНОСТИ .......................................................................................................................152
