Оглавление
ВВЕДЕНИЕ ............................................................................................................................. 6
Актуальность исследования .......................................................................................................... 6
Степень разработанности темы исследования.............................................................................. 8
Задачи исследования: ..................................................................................................................... 9
Научная новизна исследования ................................................................................................... 10
Теоретическая и практическая значимость исследования ......................................................... 11
Методология и методы исследования ......................................................................................... 13
Положения, выносимые на защиту: ............................................................................................ 14
Степень достоверности и апробация результатов диссертационного исследования ................ 15
Личный вклад автора в получение результатов.......................................................................... 17
Внедрение результатов исследования в практику ...................................................................... 17
Соответствие диссертации паспорту научной специальности................................................... 18
Объем и структура диссертации.................................................................................................. 18
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Формирование иммунологической толерантности к аллоантигенам плода: основные иммунологические механизмы, основанные на углевод-белковом взаимодействии, поддерживающие гомеостаз при беременности....................... 19
1.1.–Основные клеточные и гуморальные механизмы, обеспечивающие толерантность к аллоантигенам .............................................................................................................................. 19
1.1.1. Иммунные механизмы, обеспечивающие развитие периферической толерантности при беременности ..................................................................................................................... 20
1.1.2. Иммунные механизмы, обеспечивающие развитие центральной толерантности при беременности ............................................................................................................................ 25
1.2. Углевод-опосредованные иммунные механизмы, регулирующие развитие толерантности к аллоантигенам .................................................................................................. 36
1.2.1. Гликокод плаценты в норме и при патологии, его значение для морфогенеза и развития периферической толерантности ............................................................................... 37
1.2.2. Роль гликан-опосредованных межклеточных контактов в процессах морфогенеза плаценты ................................................................................................................................... 39
1.2.3. Особенности гликотипа плаценты в норме и при патологии беременности ........... 50
1.2.4. Центральная и периферическая толерантность при беременности: обоснование с позиции гипотезы фето-эмбриональной защиты (FEDS) ....................................................... 54
1.2.5. Общая характеристика основных семейств эндогенных лектинов организма ........ 55
1.2.6. Регуляторные взаимодействия функциональных углеводных групп гликоконъюгатов с рецепторным аппаратом иммунных клеток на локальном и системном уровнях 59
1.2.7. Антигликановые антитела - регуляторные молекулы иммунной системы .............. 73
1.3. Гликопатология ................................................................................................................. 82
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ .............................................. 87
2.1. Организация работы, объем и дизайн исследования ........................................................... 90
2.2. Стандартные методы исследования (Общеклинические, клинико-лабораторные и инструментальные методы) ......................................................................................................... 94
2.3. Специальные методы исследования ..................................................................................... 96
2.3.1. Морфогистохимические методы .................................................................................... 96
2.3.2. Молекулярно-генетические методы............................................................................. 104
2.3.3. Биохимические методы ................................................................................................ 105
2.3.4. Иммунологические методы .......................................................................................... 109
2.3.5. Статистические методы ................................................................................................ 122
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ ............................... 125
3.1. Макро- и микроскопическое исследование ткани плаценты ............................................ 125
3.2. Иммуно- и гистохимическое исследование ткани плаценты ........................................ 125
3.2.1. Особенности гликанового профиля плаценты при ЗРП ......................................... 126
3.2.2. Исследование фукозилированных гликанов при ЗРП ............................................ 136
3.2.3. Особенности гликанового профиля плаценты при ПЭ ........................................... 139
3.2.4. Исследование фукозилированных гликанов при ПЭ .................................................. 148
3.3. Экспрессия мРНК генов иммунорегуляторных белков в ткани плаценты ....................... 151
3.4. Выделение плацента-ассоциированных АгАТ................................................................... 154
3.4.1. Оптимизация выделения плацента-ассоциированных АгАТ из ткани плаценты ...... 154
3.4.2. Исследование стабильности выделенных плацента-ассоциированных АгАТ при хранении в различных условиях. ........................................................................................... 157
3.5. Характеристика плацента-ассоциированных АгАТ ....................................................... 160
3.5.1. Анализ частоты встречаемости АгАТ некоторых специфичностей в элюатах плаценты и периферической крови матери ........................................................................... 160 3.5.2. Аффинное выделение из иммуноглобулинового препарата антител против антигенов Галили, Tn, Neu5Acβ-Bn ....................................................................................... 168
3.5.3. Содержание и соотношение изотипов IgG в образцах аффинно выделенных АгАТ 169
3.5.4. Углеводная специфичность аффинно выделенных АгАТ ...................................... 175
3.6. Характеристика мишеней в тканях плаценты и биологических эффектов плацента-ассоциированных АгАТ ............................................................................................................. 183
3.6.1. Подтверждение мишеней углеводной природы для плацента-ассоциированных АгАТ в ткани плаценты ......................................................................................................... 183
3.6.2. Изучение влияния эффекта предобработки аффинно выделенными антителами клеток линии EA.hy926 на экспрессию маркеров активации эндотелия ............................. 186 3.6.3. Изучение влияния аффинно выделенных АгАТ на экспрессию клетками линии EAhy.926 маркеров активации в различных экспериментальных условиях ........................ 189 3.6.4. Изучение влияния аффинно выделенных анти-Neu5Acβ антител на гибель клеток линии EAhy.926 ...................................................................................................................... 192 3.6.5. Исследование дозозависимого эффекта анти-Neu5Acβ антител на активационный статус клеток линии EA.hy 926 .............................................................................................. 193 3.7. Исследование субпопуляционного состава иммунокомпетентных клеток в периферической крови матери и пуповинной крови новорожденных .................................... 195 3.7.1. Оценка мажорных и минорных субпопуляций В-лимфоцитов в периферической и пуповинной крови .................................................................................................................. 196 3.7.2. Оценка мажорных и минорных субпопуляций Т-лимфоцитов в периферической и пуповинной крови .................................................................................................................. 199 3.7.3. Оценка мажорных и минорных субпопуляций NK-лимфоцитов в периферической и пуповинной крови .................................................................................................................. 202
3.8. Содержание прогестерона и IL-6 в периферической и пуповинной крови ...................... 203
3.9. Характеристика профилей АгАТ у пациенток с физиологической беременностью и беременностью, осложненной ПЭ и ЗРП .................................................................................. 205
3.9.1. Межгрупповые различия по АгАТ у пациенток с физиологической и осложненной беременностью на сроках, соответствующих ранней манифестации ПЭ и ЗРП ................. 205
3.9.2. Межгрупповые различия по АгАТ у пациенток с физиологической и осложненной беременностью на сроках, соответствующих поздней манифестации ПЭ и ЗРП ............... 206
3.9.3. Межгрупповые различия по АгАТ у пациенток с физиологической беременностью и беременностью, осложненной гипертензивными расстройствами ................................... 211
3.10. Расчет сигнатур АгАТ для дифференциальной диагностики ГРБ .................................. 216 3.11 Репертуар АгАТ пуповинной крови здоровых новорожденных и новорожденных с перинатальной патологией ........................................................................................................ 223
3.12. Расчет сигнатур АгАТ для предикции состояния здоровья новорожденного ................ 231
3.13. Характеристика профилей специфичности галектинов человека ................................... 233
3.14. Сопоставление специфичности АгАТ, выявленных в периферической крови беременных с ГРБ и пуповинной крови новорожденных, со специфичностью галектинов .. 237
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ ................................................................................................ 240
4.1. Патофизиологические изменения гликанов плаценты при плацента-ассоциированных осложнениях беременности ....................................................................................................... 241
4.2. Патогенетические особенности продукции факторов периферической толерантности при плацента-ассоциированных осложнениях беременности ........................................................ 256
4.3. Патогенетические особенности системного иммунитета (клеточное звено) у беременных с ПЭ и их новорожденных ......................................................................................................... 274
4.4. Патогенетические особенности системного иммунитета (гуморальное звено) у беременных с ПЭ и их новорожденных .................................................................................... 285
4.5. Приложение полученных данных к диагностике ПЭ и прогнозу неонатальных исходов 298
ВЫВОДЫ............................................................................................................................. 308
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ........................................................................... 311
БЛАГОДАРНОСТЬ ............................................................................................................ 312
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ............................................................................................... 313
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ................................................................................................. 317
ПРИЛОЖЕНИЕ .................................................................................................................. 362
