Введение
1. Обзор литературы 9
1.1. Микробиота человека 9
1.1.1 Общая характеристика микробиоты человека 9
1.1.2 Микробиота кишечника человека и её состав 11
1.1.3 Взаимодействие кишечной микробиоты с организмом хозяина 13
1.2. Лактобациллы и бифидобактерии - постоянный компонент микробиоты человека 18
1.2.1 Общая характеристика лактобацилл и бифидобактерии 18
1.2.2 Местообитание 19
1.2.3 Таксономическое разделение 19
1.2.4 Лактобациллы и бифидобактерии - пробиотики и психобиотики 25
1.3 Гамма-аминомасляная кислота 29
1.3.1 Общая характеристика свойств гамма-аминомасляной кислоты 29
1.3.2 ГАМКи её рецепторы в организме человека 29
1.3.3 Функции ГАМК в нервной системе человека и её связь с заболеваниями 30
1.3.4 Синтез Г АМК микроорганизмами 31
1.3.5 Характеристика генов и белков, обусловливающих синтез ГАМК 34
1.3.6 Функции ГАМК в кишечнике 39
1.3.7 ГАМК-синтезирующие лактобациллы и бифидобактерии из кишечной микробиоты человека как векторы доставки ГАМК в кищечник 39
1.4 Катехоламины и серотонин 41
1.4.1 Общая характеристика катехоламинов и серотонина 41
1.4.2 Роль катехоламинов и серотонина в нервной системе человека 43
1.4.3 Влияние катехоламинов и серотонина на метаболизм бактерий 45
ГЛАВА 2. Материалы и методы 51
2.1 Микробиологические методы 51
2.1.1 Штаммы бактерий, использованные в работе 51
2.1.2 Среды и условия роста 55
2.1.3 Определение вида лактобацилл
2.2 Использованные в работе животные 57
2.3 Молекулярно-генетические методы
2.3.1 Выделение ДНК 58
2.3.2 Конструирование праймеров и проведение ПЦР 58
2.3.3 Электрофорез ДНК в агарозном геле 59
2.3.4 Секвенирование ДНК 59
2.3.5 Выделение тотальной РНК 59
2.3.6 Обратная транскрипция 60
2.3.7 Количественная ПНР в режиме реального времени 61
2.4 Биохимические методы 62
2.4.1 Тонкослойная хроматография 62
2.4.2 Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) 62
ГЛАВА 3. Результаты и обсуждения 65
3.1 Идентификация и характеристика штаммов лактобацилл, выделенных из трёх
биотопов человеческого тела 65
3.1.1 Видовая идентификация изолятов лактобацилл, населяющих кишечник, ротовую
полость и влагалище человека 65
3.2 Изучение синтеза ГАМК из лабораторной коллекции штаммами лактобацилл и
бифидобактерий 68
3.2.1 Отбор штаммов лактобацилл и бифидобактерий, синтезирующих и выделяющих в среду ГАМК 68
3.2.2 Определение количества ГАМК, синтезируемой лактобациллами и бифидобактериями.69
3.2.3 Наличие генов глютаматдекарбоксилазы у штаммов лактобацилл и бифидобактерий 72
3.2.4 Характеристика синтеза ГАМК у 4-х штаммов бактерий, отобранных в качестве пробиотиков 75
3.2.5 Характеристика генов, обусловливающих синтез ГАМК 82
3.2.6 Изучение экспрессии гена глутаматдекарбоксилазы gady штаммаL.plantarum 90sk 86
Данный раздел работы был выполнен в Институте морфологии человека РАМН совместно с
Ю.Е. Козловским 90
3.2.7 Определение влияния штамма L.plantarum 90sk на крыс в условиях холодового холода.90 3.3 Изучение влияния катехоламинов и серотонина на рост и транскрипционную активность лактобацилл и бифидобактерий 94
3.3.1 Оптимизация условий опытов по влиянию нейротрансмиттеров на рост лактобацилл и бифидобактерий 94
3.3.2 Изучение влияния норадреналина, адреналина, дофамина и серотонина на рост лактобацилл и бифидобактерий 97
3.3.3 Изучение влияния норадреналина на транскрипционную активность генов L.plantarum 90sk методом ПЦР в реальном времени 108
Заключение 111
Выводы 112
Список сокращений, использованных в работе 114
Список литературы
