Введение
1. Обзор литературы 10
1.1. Трансдукция сигналов в растениях 10
1.1.1. Рецепторы 10
1.1.2. G-белки 15
1.1.3. Протеинкиназы и протеинфосфатазы 16
1.1.4. Факторы транскрипции 18
1.1.5. Генетическая детерминированность взаимоотношений растения и патогена 19
1.2. Сигнальные системы растений 21
1.2.1. МАР-киназная сигнальная система 23
1.2.2. Липоксигеназная сигнальная система 24
1.2.3. Фосфатидатная сигнальная система 25
1.2.4. Кальциевая сигнальная система 26
1.2.5. НАДФН-оксидазная сигнальная система 29
1.2.6. Ж--синтазная сигнальная система 30
1.2.7. Протонная сигнальная система 32
1.3. Аденилатциклазная сигнальная система 33
1.3.1. Аденилатциклаза 34
1.3.2. цАМФ как вторичный мессенджер 41
1.3.3. Фосфодиэстераза цАМФ 45
1.3.4. цАМФ-зависимые протеинкиназы 48
1.3.5. цАМФ-связывающие белки 49
1.3.6. цАМФ-регулируемые ионные каналы 50
1.4. Взаимодействие сигнальных систем 51
1.5. Фитопатогены и их метаболиты 53
1.5.1. Специфические и неспецифические факторы вирулентности 53
1.5.2. Элиситоры и супрессоры фитопатогенов 56
1.6. Clavibactermichiganensissubsp.sepedonicus (cms) 61
1.7. Цель и задачи исследования 64
2. Объекты и методы исследования 66
2.1. Растительный материал 66
2.2. Культивирование бактериальных клеток 67
2.3. Выделение и очистка ЭПС 67
2.4. Метод дифференциального центрифугирования в градиенте сорбита для выделения фракции ядер и хлоропластов 68
2.5. Подготовка образцов для определения активности «растворимой» и трансмембранной АЦ 68
2.6. Приготовление образцов для определения концентрации цАМФ. 69
2.7. Иммуноферментный метод (ИФА) 70
2.8. Приготовление образцов для электронной микроскопии 71
2.9. Метод иммуно-электронной цитохимии для выявления цАМФ с использованием первичных антител против цАМФ (ПАТ) и вторичных антител, меченных золотом (ВАТ) 72
2.10. Метод капиллярного электрофореза для идентификации цАМФ и доказательства отсутствия в растительной пробе других циклических нуклеотидов 73
2.11. Спектроскопия ЯМР для идентификации цАМФ и доказательства отсутствия в растительной пробе других циклических нуклеотидов 76
3. Результаты исследования и их обсуждение 79
3.1. Выявление активности и оптимума рН трансмембранной (плазмалемной) аденилатциклазы. Влияние ЭПС Cms на эти показатели 79
3.2. Выявление активности аденилатциклазы во внутриклеточных компатрментах растений in vitro устойчивого и восприимчивого к Cms сортов картофеля. Влияние на активность данного фермента ЭПС Cms 87
3.2.1. Выявление методом ИФА трансмембранной и «растворимой» форм аденилатциклазы в ядрах и хлоропластах 87
3.2.2. Ультраструктурная иммуноцитохимия 95
3.3. Влияние ЭПС Cms на динамику концентрации внутри- и внеклеточного цАМФ в суспензионных клетках картофеля 109
3.4. Участие цАМФ в развитии системного сигнала под влиянием ЭПС Cms в пробирочных растениях картофеля 114
Заключение 122
Выводы 129
Список литературы 131
