Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 9
1.1. Основные теории старения 9
1.2.Посттрансляционные модификации белков 15
1.2.1. Молекулярные механизмы дезамидирования 17
1.2.2. Возможные пути окислительной модификации белков 21
1.2.3. Роль неферментативного дезамидирования и других посттрансляционных модификаций в процессах старения белков 26
1.3. Старение и интенсивность обновления белков в клетке 33
1.4. Типы клеток тканей позвоночных и процессы старения 34
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 39
2.1. Материалы исследования и постановка эксперимента 39
2.2. Методы исследования 40
2.2.1. Выделение и очистка тканевых белков 40
2.2.2. Выделение и хроматографическая очистка препаратов сывороточного альбумина 42
2.2.3. Определение содержания белка методом Lowry (1951) в модификации Schaterle(1973) 46
2.2.4. Окислительная модификация сывороточного альбумина в среде Фентона (Дубинина Е.Е., 2000) 46
2.2.5. Определение содержания амидных групп белков флуорометрическим методом (Sugawara К., 1981) в модификации (Шепотиновская И.В., 1995) 47
2.2.6. Определение сульфгидрильных групп в белках колориметрическим методом при помощи 5,5 -дитиобис(2-нитробензойной) кислоты (ДТНБК) (Веревкина И.В., 1977) 47
2.2.7. Определение содержания карбонильных групп белков спектро-фотометрическим динитрофенилгидразиновым методом (Дубинина Е.Е., 1995) 48
2.2.8. Определение образования битирозина и окисления триптофана в белках, инкубированных в среде Фентона (Дубинина Е.Е., 2000) 49
2.2.9. Исследование собственной флуоресценции белков препарата альбумина 49
2.2.10. Электрофорез препаратов альбумина после инкубации в среде Фентона (Laemmli, 1970) 50
2.3. Статистическая обработка результатов исследования 50
ГЛАВА 3. Результаты исследования и их обсуждение 52
3.1. Возрастные изменения содержания амидных, сульфгидрильных и карбонильных групп в суммарных белках разных тканей белых крыс 52
3.1.1. Изменение содержания амидных групп суммарных белков тканей белых крыс при старении 52
3.1.2. Изменение содержания SH-групп в суммарных белках различных тканей крыс при их физиологическом старении 65
3.1.3. Карбонилирование суммарных белков различных тканей крыс при их физиологическом старении 73
3.2. Изменения амидированности и окислительных модификаций сывороточного альбумина старых крыс 84
3.2.1. Выделение и очистка сывороточного альбумина крыс 84
3.2.2. Амидированность сывороточного альбумина молодых и старых крыс 86
3.2.3. Окислительные модификации сывороточного альбумина крыс 89
3.3. Окислительные модификации и амидированность сывороточного альбумина при его инкубации в среде Фентона 98
3.3.1. Окислительные модификации сывороточного альбумина при его инкубации в среде Фентона 98
3.3.2. Изучение амидированности сывороточного альбумина, инкубированного в среде Фентона 105
3.3.3. Конформационные изменения сывороточного альбумина при его инкубации в среде Фентона 109
3.4. Изменение амидированности и окислительных модификаций БСА при инкубации в условиях, моделирующих физиологические 115
3.4.1. Изменение степени амидированности БСА при инкубации в условиях, моделирующих физиологические 115
3.4.2. Исследование процессов окислительной модификации препарата БСА при его инкубации в условиях, моделирующих физиологические 117
Заключение 122
Выводы 132
Список литературы
