Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы. 13
1.1. Фаза I биотрансформации 13
1.1.1. Структура и свойства CYP1A1 16
1.1.1.1. Механизм активации транскрипции гена CYP1A1 20
1.1.1.2. Транскрипционная и пост-трансляционная регуляция CYP1A1 нетипичными индукторами 21
1.1.1.3. Восстановительный метаболизм аристолоховой кислоты 22
1.1.1.4. Полиморфизм гена CYP1A1 24
1.1.1.4.1. Гидроксилирование эйкозапентаеновой кислоты 26
1.1.1.4.2. Гидроксилирование метаболитов эстрогена 28
1.1.1.4.3. Метаболизм бензопирена 31
1.1.2. Структура и свойства CYP2C9 33
1.1.2.1. Первая кристаллическая структура фермента CYP2C9 33
1.1.2.1.1. Сравнительный анализ кристаллических структур CYP2C9 10G5ulR90 35
1.1.2.1.2. Роль аминокислотного остатка Arg97 в структуре фермента CYP2C9 39
1.1.2.1.3. Роль аминокислотного остатка Asp293 в структуре фермента CYP2C9 40
1.1.2.2. Локализация гена CYP2C9 и способность к индукции 41
1.1.2.3. РВ-распознающие элементы 41
1.1.2.4. Ядерный рецептор CAR 43
1.1.2.4.1. Транслокация CAR в ядро 43
1.1.2.4.2. Стероидные гормоны как модуляторы активности CAR 44
1.1.2.5. Распознающие элементы гена CYP2C9 45
1.1.2.6. PXR-опосредованная индукция CYP2C9 рифампицином, гиперфорином и фенобарбиталом 46
1.1.2.7. Пост-трансляционная регуляция CYP2C9 48
1.1.2.8. Полиморфизм гена CYP2C9 50
1.1.2.8.1. Влияние полиморфизма в CYP2C9 на N-гидроксилирование сульфаметоксазола 57
1.1.2.8.2. Активация полиморфных вариантов CYP2C9 эффектором дапсоном 52
1.1.2.8.3. CYP2C9 генотип-зависимое влияние бензбромарона на метаболизм флурбипрофена 54
1.1.2.8.4. Предрасположенность к мультифакториальным заболеваниям 57
1.1.3. Другие представители семейства CYP2 58
1.1.3.1. Структура и свойства CYP2C19 58
1.1.3.1.1. Локализация гена CYP2C19 и способность к индукции 60
1.1.3.1.2. Полиморфизм гена CYP2C19 62
1.1.3.2. Структура и свойства CYP2D6 63
1.1.3.2.1. Кристаллическая структура фермента CYP2D6 63
1.1.3.2.1.1. Гем-связывающий домен CYP2D6 66
1.1.3.2.1.2. Активный центр фермента CYP2D6 66
1.1.3.2.1.3. Роль аминокислотных остатков Asp301 и Glu216 в структуре фермента CYP2D6
4 1.1.3.2.1.4. Роль аминокислотного остатка Phel20 в структуре фермента CYP2D6 69
1.1.3.2.2. Локализация гена CYP2D6 и способность к индукции 70
1.1.3.2.3. Полиморфизм гена CYP2D6 70
1.2. Фаза II биотрансформации 73
1.2.1. Суперсемейство GSTs 74
1.2.1.1. Локализация GSTT1 и генетический полиморфизм 75
1.2.1.2. Локализация GSTM1 и генетический полиморфизм 76
1.2.2. Ариламин-Ы-ацетилтрансферазы (NATs) 77
1.2.2.1. Локализация NAT2 и генетический полиморфизм 79
1.2.3. Хинонредуктаза NQ01 81
1.3. Гены системы фолатного метаболизма 83
1.3.1. Метилентетрагидрофолатредуктаза (MTHFR) 83
1.3.1.1. Полиморфизм гена MTHFR 85
1.3.2. Метионинсинтаза (MS) и метионинсинтазаредуктаза (MTRR) 89
1.4. Генетический полиморфизм и онкологические заболевания 92
1.5. Микрочипы в диагностике и лечении лимфопролиферативных заболеваний... 95
ГЛАВА 2. Материалы и методы 101
2.1. Пациенты ЮГ
2.2. Исследуемые образцы 103
2.3. Синтез олигонуклеотидов и изготовление микрочипов 105
2.4. Мультиплексная полимеразная цепная реакция (ПЦР) 106
2.5. Визуализация ПЦР продуктов в агарозном геле ПО
2.6. Гибридизация, регистрация изображения и обработка полученных результатов ПО
2.7. Секвенирование 112
2.8. Статистическая обработка результатов 113
ГЛАВА 3. Результаты и обсуждение 115
3.1. Разработка нового варианта биочипа для анализа полиморфизма в генах системы биотрансформации 115
3.2. Полиморфизм генов системы биотрансформации и риск развития лейкозов и лимфом во взрослом возрасте . 117
3.2.1. Распределение CYP1A1 и GSTM1 генотипов 117
3.2.1.1. Сочетание CYP1A1 и GSTM1 генотипов 119
3.2.2. Межполовые различия в частотах полиморфных вариантов генов системы биотрансформации 121
3.2.2.1. Распределение CYP1A1 генотипов у мужчин 121
3.2.2.2. Распределение GSTT1 и GSTM1 генотипов у женщин 123
3.2.2.3. Распределение аллелей гена CYP2C9 у мужчин 125
3.3. Полиморфизм генов системы биотрансформации и риск развития острого лейкоза у детей 128
3.3.1. Распределение GSTs и NAT2 генотипов 128
3.3.1.1. Распределение GSTs генотипов 128
3.3.1.2. Распределение NAT2 генотипов 130
3.3.1.3. Сочетание GSTs и NAT2 генотипов 132
3.3.2. Анализ распределения генотипов CYP1A1, GSTs, NAT2 и MTRR при разделении пациентов, больных острыми лейкозами, и здоровых доноров на группы по половому признаку 133
3.3.2.1. Распределение GSTs генотипов 133
3.3.2.2. Распределение NAT2 генотипов 136
3.3.2.3. Сочетание GSTs и NAT2 генотипов 136
3.3.2.4. Распределение MTRR генотипов у девочек 138
3.3.2.4.1. Сочетание GSTs и MTRR генотипов у девочек 139
3.4. Полиморфизм генов системы биотрансформации и риск развития рецидива острого лейкоза у детей 141
3.4.1. Распределение CYP1A1 и GSTs генотипов 141
3.4.1.1. Сочетание CYP1A1 и GSTs генотипов 145
3.4.2. Распределение NAT2 генотипов 147
3.4.2.1. Сочетание GSTs и NAT2 генотипов 149
3.4.3. Анализ распределения генотипов CYP1A1, GSTs и NAT2 при разделении пациентов, больных ОЛЛ или ОМЛ, по половому признаку 152
3.4.3.1. Распределение CYP1A1 и GSTs генотипов у мальчиков, больных острыми лейкозами. Сочетание генотипа CYP1A1 *1/*2А и GSTs генотипов 152
3.4.3.2. Распределение CYP1A1 и GSTs генотипов у девочек, больных острыми лейкозами. Сочетание генотипа CYP1A1 *1/*2А и GSTs генотипов 153
3.4.3.3. Распределение NAT2 генотипов 155
3.4.3.4. Сочетание GSTs и NAT2 генотипов 156
Заключение 159
Выводы. 162
Список литературы...
