Введение
Глава 1. Дихлорметан - антропогенный поллютант из класса галометанов 10
Глава 2. Микробная деградация дихлорметана
2.1. Особенности биологии аэробных метилотрофных бактерий 12
2.2. Аэробные метилобактерии - деструкторы дихлорметана 20
Глава 3. Минерализация дихлорметана аэробными метилобактериями
3.1. Этимологические и генетические аспекты дегалогенирования ДХМ 24
3.2. Адаптация аэробных метилобактерии к минерализации дихлорметана 28
Экспериментальная часть
Глава 4. Материалы и методы
4.1. Объекты исследований 46
4.2. Культивирование бактерий 46
4.3. Исследование ультраструктуры клеток
4.3.1. Получение ультратонких срезов бактериальных клеток и электроннаяикроскопия
4.3.2. Рентгеновский микроанализ элементного состава компартменюв клеток 47
4.4. Определение фосфолипидного состава клеток 48
4.5. Определение состава жирных кислот 49
4.6. Определение аминокислотного состава 50
4.7. Определение активности глутатионредуктазы 50
4.8. Определение концентрации ионов хлора 51
4.9. Очистка дихлорметандегалогеназ
4.9.1. Получение бесклеточных экстрактов 51
4.9.2. Высокоскоростная жидкостная хроматография 52
4.10. Определение активности дихлорметандегалогеназ 52
4.11. Фракционирование изотопов Си С1 при биодеградации ДХМ
4.11.1. Условия эксперимента 53
4.11.2. Определение изотопного состава дихлорметана и СОг 54
4.11.3. Определение доли потребления дихлорметана 56
4.12. Влияние ингибиторов электронного транспорта на биодеградацию ДХМ 57
4.13. Адаптация клеток деструкторов к присутствию ионов хлора в среде
4.13.1. Оценка длительности лаг-периода в потреблении ДХМ при адаптации к ионам хлора в среде 58
4.13.2. Влияние стрессоров на длительность лаг-периода в потреблении ДХМ 58
4.13.3. Определение времени начала экспрессии дихлорметандегалогеназ 59
4.14. Денатурирующий гель-электрофорез белков в ПААГ 60
4.15. Оценка выживаемости клеток метилобактерий 60
Результаты и обсуждение
Глава 5. Структурно-функциональная модификация клеток деструкторов при деградации ДХМ
5.1. Изменения состава жирных кислот и фосфолипидов клеток 61
5.2. Морфология и ультраструктура метилобактерий в присутствии ионов С Г 66
5.3. Изменения состава аминокислот клеток и активности глутатнонредуктазы 74 Глава 6. Механизмы транспорта ДХМ у деструкторов
6.1. Сравнительный анализ динамики потребления и дегалогенирования ДХМ 77
6.2. Фракционирование изотопов 12ШС и 35/37С1 при биодеградации ДХМ 77
6.3. Оценка энергозависимости процесса биодеградации ДХМ 87
Глава 7. Адаптация деструкторов ДХМ к внутриклеточной продукции СГ
7.1. Экскреция ионов СГ деструкторами при дегалогенировании ДХМ 94
Заключение 101
Выводы 103
Список литературы 104
