Введение
ГЛАВА 1. Целлюлазы в биотехнологии 9
ГЛАВА 2. Грибные и бактериальные целлюлазные системы. продуценты «нейтральных» целлюлаз 11
ГЛАВА 3. Общая характеристика целлюлолитических ферментов 14
3.1. Компонентный состав целлюлазных комплексов 14
3.2. Механизм действия целлюлаз 20
3.3. Доменная структура целлюлаз 25
3.4. Современные представления о классификации целлюлаз 26
ГЛАВА 4. Получение рекомбинантных целлюлаз и регулирование их свойств с помощью генно-инженерных методов 29
Экспериментальная часть 34
ГЛАВА 5. Объекты исследования и методика эксперимента 34
5.1. Исходные вещества 34
5.2. Аналитические методы 36
5.3. Методы определения активности 37
5.4. Определение активности ферментов с помощью окрашенных субстратов 38
5.5. Определение тополитической активности целлюлаз 38
5.6. Проведение ферментативного гидролиза микрокристаллической и карбоксиметилцеллюлозы 39
5.7. Определение состава продуктов реакции гидролиза МУФ-целлобиозида 39
5.8. Методы изучения стабильности целлюлолитических ферментов 40
5.9. Методы изучения адсорбционных характеристик ферментов 40
5.10. Определение кинетических параметров ферментов 41
5.11. Выделение и очистка индивидуальных целлюлолитических ферментов целлюлазного комплекса С. cellulolyticum 41
5.12. Выделение рекомбинантной эндоглюканазы с молекулярной массой 25 кДа .42
5.13. Определение биохимических параметров очищенных ферментов 43
5.14. Определение молекулярно-массового распределения (3-глюкана ячменя 44
5.15. Оценка влияния целлюлаз на ресорбцию индиго на целлюлозной матрице 44
ГЛАВА 6. Выделение и очистка основных компонентов целлюлазного комплекса chaetomium cellulolyticum. Исследование их специфичности 46
6.1. Схема очистки ферментов С. cellulolyticum 46
6.2. Субстратная специфичность выделенных ферментов 52
ГЛАВА 7. Зависимость активности и стабильности ферментов с. Cellulolyticum от температуры и Рн среды 56
7.1. рН- и температурные зависимости активности ферментов 56
7.2. Стабильность ферментов целлюлазного комплекса С. cellulolyticum 59
ГЛАВА 8. Кинетические свойства ферментов целлюлазного комплекса с. cellulolyticum 64
8.1. Определение типа действия белков С. cellulolyticum на основе полного ферментативного гидролиза карбоксиметилцеллюлозы и микрокристаллической целлюлозы 64
8.2. Изменение молекулярно-массового распределения |3-глюкана при действии целлюлаз С. cellulolyticum 66
8.3. Кинетические параметры ферментов 71
8.4. Ингибирование продуктом реакции целлобиогидролазы целлюлазного комплекса С. cellulolyticum 72
8.5. Адсорбционные характеристики ферментов 73
8.6. Синергизм между эндоглюканазами и целлобиогидролазой 73
ГЛАВА 9. Исследование возможности применения целлюлаз С. cellulolyticum 75
9.1. Тополитическая активность ферментов 75
9.2. Оценка влияния целлюлаз С. cellulolyticum на ресорбцию индиго 78
ГЛАВА 10. Получение и свойства рекомбинантной эндоглюканазы с молекулярной массой 25 кДа 81
10.1. Получение рекомбинантного фермента 81
10.2. Свойства рекомбинантной Эндо-25 87
Выводы 94
Список литературы 95
