Введение
1. Обзор литературы 15
1.1. Историческая справка 15
1.2. Эпизоотическая ситуация по болезни Марека 17
1.3. Характеристика вируса болезни Марека 18
1.4. Классификация и биологические свойства ВБМ 22
1.5. Классификация вируса болезни Марека серотипа 1 в соответствии с принципами патотипирования 24
1.6. Патотипирование методом «Best Fit» ADOL 28
1.7. Вирусы БМ серотипа 2 30
1.8. Вирусы БМ серотипа 3 31
1.9. Эпизоотологические особенности 33
1.10. Клинические признаки 35
1.11. Патологоанатомические и гистологические изменения 37
1.12. Диагностика 39
1.12.1. Иммунодиагностика ВБМ 40
1.13. Иммунитет 44
1.14. Контроль и специфическая профилактика 47
1.15. Заключение по обзору литературы 50
2. Собственные исследования 52
2.1. Материалы и методы 52
2.1.1. Вирусы 52
2.1.2. Изоляты ВБМ 52
2.1.3. Культуры клеток 52
2.1.4. Испытуемые сыворотки для непрямого ИФА 53
2.1.5. Лабораторные животные 53
2. Ь6. Специфические компоненты .- 53
2.1.7. Диагностические наборы 53
2.2. Оборудование 53
2.3. Методы 54
2.3.1. Изоляция ВБМ из крови кур 54
2.3.2. Трипсинизация куриных эмбрионов 55
2.3.3. Серотипирование изолятов ВБМ 55
2.3.4. Выявление Аг ВЛП р27 в сыворотке крови кур иммуноферментным анализом 55
2.3.5. Выявление вируса ретикулоэндотелиоза (ВРЭ) в реакции непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ) 56
2.3.6. Выявление ВИАЦ методом ПЦР в реальном времени 56
2.3.7. Выращивание и пассирование ВБМ 59
2.3.8. Замораживание клеток 59
2.3.9. Сбор единичных колоний ВБМ-1 60
2.3.10. Титрование вируса болезни Марека 60
2.3.11. Выявление Ат к ВБМ в сыворотке крови кур реакцией диффузионной преципитации 61
2.3.12. Получение вирусного Аг для проведения непрямого ИФА 61
2.3.13. Непрямой вариант ИФА 61
2.3.14. Электрофорез в ПААГ-ДСН 62
2.3.15. Иммуноблоттинг 63
2.3.16. Статистическая обработка результатов 64
3. Результаты 65
3.1. Определение вирулентности полевых изолятов ВБМ-1 65
3.1.1. Чувствительность СПФ-цыплят линии Щелково 65
3.1.2. Выявление контаминации изолятов ВБМ-1 чужеродными вирусами 69
3.1.3. Определение вирулентности изолятов вируса БМ первого серотипа... „ „ 71
3.1.4. Первичная оценка вирулентности полевых изолятов вируса БМ первого серотипа на СПФ-цыплятах линии Щелково 72
3.1.5. Определение патотипа полевых изолятов вируса БМ первого серотипа модифицированным методом «Best Fit» 74
3.1.6. Географическое распределение изолятов вируса БМ первого серотипа 80
3.2. Разработка непрямого варианта твердофазного ИФА для определения поствакцинальных антител в сыворотке крови кур к вирусу БМ первого серотипа 87
3.2.1. Получение антигена 87
3.2.2. Определение концентрации белка в полученном лизате... 88
3.2.3. Определение структурного состава и антигенной активности вирусного препарата 89
3.2.4. Разработка имму но ферментной тест-системы для выявления антител к вирусу БМ 91
3.2.5. Приготовление высокоположительного и положительного контролей 95
3.2.6. Определение параметров внутренних контролей качества 96
3.2.7. Оценка диагностических параметров разработанной иммуноферментной тест-системы
4. Обсуждение 104
Выводы 113
Библиографический список
