Введение
Глава 1. Обзор литературы 12
1.1. Системная красная волчанка 12
1.2. Этиология системной красной волчанки 13
1.3. Ревматоидный артрит 15
1.4. Этиология ревматоидного артрита 17
1.5. Биологическая роль аутоантител к ДНК в норме и патогенезе аутоиммунных заболеваний 19
1.6. Каталитические ДНК-гидролизующие анитела и их биологическая роль в организме человека 23
1.7. Влияние антител к ДНК на клетки организма 26
1.8. Апоптоз Роль апоптоза в иммунных процессах 32
1.9. Нарушение апоптоза при СКВ и РА 33
Заключение по обзору литературы 36
Глава 2. Материалы и методы исследований 38
2.1. Объект исследования 38
2.2. Выделение AT к нДНК из крови человека 38
2.2.1. Получение сыворотки и осаждение AT сульфатом аммония 38
2.2.2. Обессоливание белков 39
2.2.3. Фракционирование антител сыворотки крови на ДЭАЭ-целлюлозе 39
2.2.4. Получение субфракций AT к нДНК аффинной хроматографией на нДНК-целлюлозе микрокристаллической 40
2.3. Исследование влияния AT к нДНК на клетки in vitro 41
2.3.1. Выделение мононуклеарных клеток, лимфоцитов и моноцитов из периферической крови человека 41
2.3.2. Исследование жизнеспособности клеток 41
2.3.3. Культивирование клеток в присутствии сывороток крови человека 42
2.3.4. Культивирование клеток в присутствии субфракций IgG-AT к нативной ДНК 42
2.3.5. Определение концентрации клеточного белка 43
2.3.6. Определение количества потребления глюкозы клетками 43
2.3.7. Определение продукции перекиси водорода моноцитами 44
2.3.8. Оценка уровня повреждения ДНК клеток 44
2.3.8.1. Оценка уровня повреждения ядерной ДНК методом флуоресцентной спектрофотометрии 44
2.3.8.2. Оценка уровня повреждения ядерной ДНК методом «ДНК-комет» 45
2.3.9. Оценка апоптоза клеток методом проточной цитометрии 47
2.4. Статистическая обработка результатов 48
Глава 3. Результаты исследований 49
3.1. Влияние AT сывороток на МНК здоровых лиц in vitro 49
3.2. Влияние AT сывороток на моноциты здоровых лиц in vitro 50
3.3. Влияние субфракций IgG-AT к нДНК на моноциты здоровых лиц 52
3.4. Генотоксичность субфракций IgG-AT к нДНК 66
3.5. Определение количества клеток на ранней стадии апоптоза после инкубации с IgG-AT к нДНК 76
Глава 4. Обсуждение результатов 82
Выводы 107
Литература 108
