Введение
1. Обзор литературы 9
1. 1. Лакказы. Определение, классификация 9
1. 2. Свойства 10
1. 3. Распространение в природе 15
1. 4. Структурная организация и эволюция лакказ 16
1. 5. Трёхдоменные лакказы базидиомицетов 23
1. 5. 1. Структура, клеточная локализация 23
1. 5. 2. Субстраты и ингибиторы 27
1. 5. 3. Физико-химические свойства 28
1. 5. 4. Функции 29
1. 5. 5. Способы получения: индукция, экспрессия 31
1. 6. Бактериальные лакказы 32
1. 6. 1. Бактериальные 3д лакказы 33
1. 6. 1. 1. Структура, клеточная локализация 33
1. 6. 1. 2. Субстраты и ингибиторы 40
1. 6. 1. 3. Физико-химические свойства 42
1. 6. 1. 4. Функции 42
1. 6. 1. 5. Способы получения: индукция, суперэкспрессия 43
1. 6. 2. Бактериальные 2д лакказы 44
1. 6. 2. 1. Структура, клеточная локализация 44
1. 6. 2. 2. Субстраты и ингибиторы 48
1. 6. 2. 3. Физико-химические свойства 51
1. 6. 2. 4. Функции 52
1. 6. 2. 5. Способы получения: индукция, суперэкспрессия 52
1. 7. Каталитические свойства лакказ 54
1. 8. Применение лакказ 58
2. Материалы и методы исследования 62
2.1. Материалы 62
2.1.1. Реактивы, ферменты, коммерческие наборы 62
2.1.2. Составы сред для культивирования бактерий 64
2.1.3. Бактериальные штаммы 64
2.1.4. Оборудование, программы, интернет ресурсы 65
2.2. Методы 66
2.2.1.Клонирование генов медьсодержащих оксидаз 66
2.2.2. Экспрессия генов медьсодержащих оксидаз в E. coli 68
2.2.3. Очистка рекомбинантных белков 71
2.2.4. Характеристика ферментов 71
3. Результаты исследования 76
3.1. Выбор объектов исследования 76
3.2. Клонирование генов двухдоменных лакказ 78
3.3. Экспрессия генов, очистка рекомбинантных белков 82
3.4. Характеристика рекомбинантных белков
3.4.1. Молекулярные свойства белков 87
3.4.2. Физико-химические свойства ферментов 88
3.4.3. Спектральные свойства ферментов 93
3.4.4. Каталитические свойства ферментов
3.5. Кристаллизация рекомбинантных лакказ 96
3.6. Обесцвечивание трифенилметановых красителей 98
4. Обусждение результатов 101
4.1. Выбор объектов исследования и методики работы 101
4.2. Клонирование и экспрессия генов 2д лакказ 101
4. 3. Очистка и характеристика 2д лакказ 104
4. 4. Кристаллизация 2д лакказ 110
4. 5. Обесцвечивание трифенилметановых красителей 2Д лакказами 112
Заключение 113
Список сокращений 115
Выводы 116
Список литературы 117
