Введение
Глава 1, Источники, структура, физико-химические характеристики и механизм действия щелочных фосфатаз бактериального и животного происхождения
1.1. Источники щелочных фосфатаз 6
1.2. Структура и аминокислотный состав щелочных фосфатаз 11
1.3. Роль ионов металлов в структуре и каталитической активности щелочных фосфатаз 17
1.4. Механизм действия щелочных фосфатаз 28
1.5. Субстратная специфичность щелочных фосфатаз 31
Глава 2. Влияние ионов металлов на каталитическую активность щелочных фосфатаз различного происхождения и их апоферментов 35
2.1. Влияние ионов металлов на активность бактериальных и животных щелочных фосфатаз 35
2.2. Влияние ионов металлов на апоферменты бактериальных и животных щелочных фосфатаз 50
Глава 3. Роль цинка и магния в биологических объектах и методы их определения 62
3.1. Значение цинка для организма человека, контроль его содержаний 62
3.1.1. Биологическая роль цинка 62
3.1.2. Методы определения цинка (II) в биологических жидкостях 63
3.2. Значение магния для организма человека, контроль его содержаний 65
3.2.1. Биологическая роль магния 65
3.2.2. Методы определения магния (II) в биологических жидкостях 67
Экспериментальная часть
Глава 4. Исходные вещества, посуда, аппаратура, методика эксперимента, обработка результатов измерений 70
4.1. Исходные вещества 70
4.2. Посуда и аппаратура 73
4.3. Методика эксперимента 74
4.4. Обработка результатов измерений 78
Глава 5. Выбор фермента, индикаторной реакции и оптимальных условий ее проведения 79
5.1. Выбор фермента 79
5.2. Выбор индикаторной системы 80
5.3. Выяснение оптимальных условий проведения индикаторной реакции 82
Глава 6. Влияние ионов металлов на каталитическую активность щелочных фосфатаз, выделенных из различных источников 94
6.1. Влияние ионов цинка на каталитическую активность щелочных фосфатаз, выделенных из трех различных источников 94
6.1.1. Выяснение тина ингибирования щелочных фосфатаз ионами цинка 98
6.1.2. Влияние ионов металлов на каталитическую активность щелочных фосфатаз различного происхождения 104
6.2. Влияние ионов цинка па каталитическую активность щелочной фосфатазы из кишки тюленя в различных буферных растворах 105
6.3. Влияние ионов магния на каталитическую активность трех щелочных фосфатаз 111
6.4. Совместное влияние ионов металлов на каталитическую активность щелочной фосфатазы из кишки тюленя в различных буферных растворах 117
Глава 7. Выбор оптимальных условий получения апоферментов щелочных фосфатаз 121
7.1. Влияние ЭДТА на каталитическую активность щелочных фосфатаз 122
7.2. Влияние органических соединений различных классов на каталитическую активность щелочной фосфатазы из кишки тюленя, 127
7.3. Получение истинного апофермента щелочной фосфатазы из кишки тюленя с использованием диализа 136
7.3.1. Выбор оптимальных условий получения апофермента щелочной фосфатазы из кишки тюленя 138
Глава 8. Реактивирование апоферментов щелочных фосфатаз из кишечника цыпленка и кишки тюленя ионами металлов 148
8.1. Реактивирование апоферментов, полученных с использованием ЭДТЛ 148
8.1.1. Изучение влияния на апоферменти ионов цинка и ряда других металлов 148
8.1.2. Изучение влияния ионов магния и кальция на апофосфатазу из кишки тюленя 153
8.1.3. Реактивирование апофосфатазы из кишки тюленя, полученной диализом , 155
8.2. Реактивирование апоферментов, полученных с использованием нитрилотриметиленфосфоновой кислоты 156
Глава 9. Разработка методики определения цинка (II) по его реактивирующему действию на апофосфатазу из кишки тюленя 162
Глава 10. Ферментативные методики определения цинка (II) и магния (II) в биологических объектах 164
10.1. Определение цинка (II) в сыворотке крови по реактивированию апофермента щелочной фосфатазы из кишки тюленя 164
10.2. Определение магния (II) в моче по его активирующему действию на каталитическую активность щелочной фосфатазы из кишечника цыпленка 167
10.2.1. Подготовка проб мочи к анализу 167
10.2.2. Методика определения магния в моче 176
Заключение 181
Выводы 187
Список литературы
