Введение
Глава 1. Бактерии-продуценты нитрилгидратазы 13
1.1. Пути метаболизма нитрилов карбоновых кислот у бактерий 13
1.2. Бактерии, утилизирующие нитрилы карбоновых кислот 14
1.3. Классификация и характеристика нитрилгидратаз 18
1.4. Механизм нитрилгидратазной реакции 22
1.5. Биохимическая регуляция активности нитрилгидратаз 25
1.6. Механизмы генетической организации и регуляции синтеза нитрилгидратаз 30
1.7. Перспективы использования штаммов-продуцентов нитрилгидратазы 33
Глава 2. Объекты и методы исследования 38
2.1. Бактериальные штаммы 38
2.2. Среды и субстраты 38
2.3. Селекция штаммов-продуцентов нитрилгидратазы 39
2.4. Методы таксономического анализа 41
2.5. Условия культивирования бактерий и определение ростовых характеристик 42
2.6. Определение активности ферментов метаболизма нитрилов карбоновых кислот, субстратов и продуктов биотрансформации 44
2.7. Методы энзиматического анализа 49
2.8. Выделение ДНК и полимеразная цепная реакция 50
2.9. Статистическая обработка 53
Глава 3. Выделение и характеристика. штаммов - продуцентов нитрилгидратазы 54
3.1. Выделение культур, утилизирующих нитрилы карбоновых кислот 54
3.2. Идентификация штаммов-продуцентов нитрилгидратазы 55
3.3 Выделение ДНК и ПЦР-амплификация генов нитрилгидратаз 60
Глава 4. Исследование влияния факторов среды на рост и нитрилгидратазнуго активность штаммов R. erythropolis 84 и R. ruber gtl 63
4.1. Зависимость нитрилгидратазной активности клеток от фазы роста культуры 63
4.2. Нитрилы и амиды как ростовые субстраты 64
4.3. Оценка токсичности нитрилов и амидов 67
4.4. Утилизация ацетонитрила 68
4.5. Зависимость роста клеток и нитрилгидратазной активности от концентрации ацетонитрила 71
4.6. Индукция ферментов нитрилами и амидами 74
4.7. Влияние источника углерода на рост и нитрилгидратазную активность бактерий 77
4.8. Влияние источника азота на рост и нитрилгидратазную активность бактерий 81
4.9. Влияние ионов металлов на рост и нитрилгидратазную активность бактерий S5
Глава 5. Характеристика нитрилгидратаз штаммов Д. erythropolis и R ruber gtl 87
5.1. Субстратная специфичность нитрилгидратаз 87
5.2. Влияние температуры на активность нитрилгидратаз 89
5.3. Влияние рН среды на активность нитрилгидратаз 89
5.4. Действие ряда ингибиторов на активность нитрилгидратаз 90
5.5. Конверсия акрилонитрила биомассой R. ruber gtl 93
Заключение 95
Выводы 103
Список литературы
