Введение
1. Красители и флуорохромы - представители ксенобиотиков-ионов:.взаимодействие с живыми клетками 9
1.1. Проблема асимметричного распределения красителей между клеткой и внешней средой 12
1.2. Роль биомембран в создании асимметричного распределения заряженных красителей между живой клеткой и средой 15
1.3. Токсичность заряженных красителей и фяуорохромов для живых клеток 20
2. Флуорохромы как индикаторы изменений в мембранах живых клеток 22
2.1. Метод флуоресцентных зондов 23
2.2. Флуоресцентные зонды в исследовании взаимодействия заряженных молекул с биомембранами S3
3 Постановка задачи 39
3. Материалы и методы исследований 4Ї
3.1. Флуоресцентные зонды 41
3.2. Ксенобиотики 41
3.3. Объекты исследований 44
3.4 Инкубация объектов с ксенобиотиками и флуоресцентными зондами 48
3.5. Оптические методы наблюдений и измерений 50
3.6. Получение денситограмм флуоресцентного изображения клеток на фотопленке 54
3.7. Измерение рН 54
3.8. Статистическая обработка результатов 55
4. Экспериментальный поиск информативной системы витальных флуоресцентных зондов 56
4.1. Флуоресценция зонда ДСМ в живых клетках 57
4.2. Флуоресценция мембранных зондов МБА и АНС в живых клетках 65
5. Свойства флуоресцентного зонда ДСМ 71
5.1. Физико-химические и оптические свойства ДСМ 71
5.2. Взаимодействие с фосфолипидными мембранами 83
5.3. Флуоресценция ДСМ в изолированных клеточных мембранах 98
5.4. Взаимодействие ДСМ с полиуглеводами и нуклеиновыми кислотами 101
5.5. Взаимодействие ДСМ с изолированными клеточными ядрами 106
6. Взаимодействие заряженных флуоресцентных зондов с живыми клетками 110
6.1. Зависимость распределения ДСМ и АНС в живых клетках от энергетического состояния митохондрий 111
6.2. Аккумуляция заряженных зондов в живой клетке: теоретические аспекты 117
6.3. Экспериментальные данные о кинетике аккумуляции ДСМ и АНС в живых лимфоцитах 132
6.4. ДСМ и АНС как флуоресцентные индикаторы некрозных клеток 138
6.5. Оценка мембранных потенциалов в живых тимоцитах с помощью зонда ДСМ 138
6.6. Действие ДСМ на живые клетки 144
7. Флуоресцентные тесты для исследования влияния ксенобиотиков на мембранные системы в живых клетках 153
7.1. Локализация флуоресцирующих фармакологических препаратов в живых клетках 154
7.2. Влияние заряженных ксенобиотиков на плазматические мембраны живых клеток 159
7.3. Оценка параметров связывания фармакологи ческих препаратов с мембраной эритроцита человека 170
7.4. Влияние заряженных ксенобиотиков на митохондрии в живых клетках 177
7.5. Оценка трансмембранных потенциалов на плазматической и митохондриальдах мемб ранах тимоцита в присутствии заряженных ксенобиотиков 188
8. Применение флуоресцентных зондов ДСМ и АНС на уровне живого организма 194
8.1. Оценка состояния мембранных систем в эмбрионе морского ежа с помощью зондов ДСМ и АНС 195
8.2. Флуоресценция ДСМ и АНС в органах живой КРЫСЫ 208
9. Обсуждение результатов 214
9.1. К вопросу о паранекротическои реакции живой клетки на повреждающее воздействие 214
9.2. О связи эффектов заряженных ксенобиотиков в живых клетках с их фармакологической ж биологической активностью на уровне орга низма 216
Заключение .219
