Введение
2. Обзор литературы 7
2.1. Принцип работы микромеханических устройств 7
2.2. Микромеханические сенсоры и измерительные устройства 10
2.3. Аптамеры 24
2.4. Сенсоры для определения тромбина с рецепторным слоем на основе тромбин-связывающего аптамера 27
2.4.1. Электрохимические сенсоры 28
2.4.2. Пьезокварцевые сенсоры 35
3. Экспериментальная часть 42
3.1. Реагенты 42
3.2. Методы исследования 42
3.2.1. Измерение поверхностного натяжения 42
3.2.2. Пьезокварцевое микровзвешивание 46
3.2.3. Регистрация спектров поглощения 46
3.2.4. Получение и обработка микрофотографий 46
3.2.5. Атомно-силовая микроскопия 47
3.2.6. Масс-спектрометрия 47
3.3. Методики 47
3.3.1. Иммобилизация 3-аминопропилтриэтоксисилана на поверхности кантилевера 47
3.3.2. Синтез 3-аминопропилсилатрана 47
3.3.3. Иммобилизация белков на поверхности кантилевера 48
3.3.4. Очистка пьезокварцевого кристалла 49
3.3.5. Иммобилизация тромбин-связывающего аптамера на поверхности электродов пьезокварцевого кристалла 49
3.3.6. Проведение адсорбционных измерений 49
3.3.7. Синтез конъюгатов тромбина с наночастицами серебра, стабилизированными меркаптоянтарной кислотой 50
3.3.8. Синтез конъюгатов тромбина с наночастицами серебра и золота, стабилизированными хитозаном 50
3.3.9. Спектрофотометрическое определение концентрации тромбина по методу Брэдфорд 51
4. Обсуждение результатов 52
4.1. Химическое модифицирование кантилевера 52
4.1.1. Модифицирование 4-аминотиофенолом 54
4.1.2. Модель изменения поверхностного натяжения на межфазной границе твердое тело - жидкость в процессе адсорбции 57
4.1.3. Модифицирование 3-аминопропилтриэтоксисиланом 63
4.1.4. Модифицирование 3-аминопропилсилатраном 66
4.1.5. Модифицирование глутаровым альдегидом 68
4.1.6. Иммобилизация белков на поверхности кантилевера 70
4.1.7. Влияние природы модификатора на изменение поверхностного натяжения в процессе сорбции 73
4.2. Агрегация лизоцима на поверхности кантилевера 77
4.3. Иммунохимический микромеханический сенсор для определения морфина 81
4.4. Микромеханический сенсор для определения тромбина 87
4.5. Пьезокварцевый сенсор для определения тромбина 88
4.5.1. Подготовка кристалла к проведению адсорбционных измерений 89
4.5.2. Иммобилизация тромбин-связывающего аптамера на поверхности пьезокварцевого резонатора 90
4.5.3. Оптимизация состава буферного раствора 91
4.5.4. Оптимизация состава регенерирующего раствора 93
4.5.5. Адсорбция тромбина на поверхности пьезокварцевого резонатора, покрытой тромбин-связывающим аптамером 95
4.5.6. Синтез наночастиц серебра и золота 101
4.5.7. Иммобилизация тромбина на поверхности наночастиц серебра и золота 104
4.5.8. Адсорбция конъюгатов тромбина с наночастицами серебра и золота на поверхности пьезокварцевого резонатора, покрытой тромбин-связывающим аптамером 105
Выводы 108
Список литературы ПО
