Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы "фосфолипаза d растений" 8
1.1. Введение 8
1.2. История исследования фосфолипазы D растений 8
1.3. Реакции, катализируемые фосфолипазой D. Гидролазная и
трансферазная активности фермента 11
1.4. Методы исследования фосфолипазы D 13
1.5. Распространение фосфолипазы D среди низших и высших растений 15
1.6. Тканевое и внутриклеточное распределение фосфолипазы D 16
1.7. Свойства фосфолипазы D 21
1.8. Регуляция активности фосфолипазы D в условиях in vivo 35
1.9. Физиологическая роль фосфолипазы D растений 39
1.10. Практическое значение растительной фосфолипазы D 51
1.11. Заключение 52
Экспериментальная часть 54
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 54
2.1. Объекты исследования 54
2.2. Реактивы и материалы 57
2.3. Приборы и оборудование 57
2.4. Приготовление пластинок для микро-ТСХ 58
2.4.1. Приготовление силикагеля для микро-ТСХ 5 8
2.4.2. Получение золя кремневой кислоты 58
2.4.3. Приготовление пластинок 58
2.5. Разделение липидов методом микро-ТСХ 59
2.6. Обнаружение липидов на хроматограммах 59
2.6.1. Неспецифическое обнаружение веществ на хроматограммах 59
2.6.2. Специфическое обнаружение веществ на хроматограммах 60
2.6.2.1. Приготовление универсального молибдатного реагента (УМР) 60
2.6.2.2. Молибдатный реагент для обнаружения фосфолипидов на хроматограммах 60
2.6.2.3. Обнаружение фосфолипидов реагентом на основе малахитового зеленого 60
2.6.2.4. Обнаружение фосфолипидов и других веществ со свободной аминогруппой 61
2.6.2.5. Обнаружение холинсодержащих соединений 61
2.7. Разработка реагента для обнаружения и быстрого разложения фосфолипидов на пластинках для микро-ТСХ 61
2.7.1. Рекомендуемая процедура 62
2.8. Количественное определение фосфолипидов 62
2.9. Выделение фосфатидилхолина из яичных желтков 63
2.10. Определение активности фосфолипазы D 64
2.10.1. Трансферазная активность 64
2.10.2. Гидролазная активность 65
2.11. Поиск ингибиторов и активаторов фосфолипазы D в побегах растений 65
ГЛАВА 3. Определение активности фосфолипазы D в растениях 67
3.1. Быстрый способ разложения фосфолипидов на ТСХ-пластинках 68
ГЛАВА 4. Распространение фосфолипазы D в крупных таксонах растений 77
ГЛАВА 5. Фосфолипаза D покоящихся семян покрытосеменных растений 82
ГЛАВА 6. Участие фосфолипазы D в физиологических процессах у растений 90
6.1. Влияние поражения растений повиликой (Citscnta japonica Choisy) на активность фосфолипазы D в них 91
6.2. Фосфолипаза D прорастающих семян 97
6.3. Изменение активности фосфолипазы D в побегах растений в течение вегетационного периода 102
ГЛАВА 7. Ингибиторы и активаторы фосфолипазы D в побегах растений 110
Заключение 116
Выводы 118
Литература
