Введение
Глава 1 Литературный обзор 11
1.1 Хрусталик человеческого глаза и его строение 11
1.2 УФ-излучение и органы зрения 13
1.3 Метаболиты хрусталика 15
1.3.1 УФ-фильтры 15
1.3.1.1 УФ-фильтры: свойства 15
1.3.1.2 УФ-фильтры: фотохимические реакции 17
1.3.1.3 УФ-фильтры: термические реакции 19
1.3.2 Антиоксиданты 22
1.4 Белки хрусталика и их модификации 25
1.4.1 Белки хрусталика 25
1.4.2 Посттрансляционные модификации белков хрусталика 26
1.5 Реакции фотовозбужденных хромофоров с белками и аминокислотами 29
1.6 Катаракта. Перспективы. Методы диагностики и лечения 29
Глава 2 Объекты и методы исследований 32
2.1 Материалы, реактивы и приготовление образцов 32
2.1.1 Материалы 32
2.1.2 Приготовление экстрактов хрусталика человека 32
2.1.3 Синтез KNY 33
2.1.4 Экстракция кристаллинов бычьего хрусталика 34
2.2 Стационарные методы 35
2.2.1 Оптическая спектроскопия 35
2.2.2 Стационарный фотолиз 35
2.3 Кинетические измерения 36
2.3.1 Флуоресцентные измерения 36
2.3.2 Лазерный импульсный фотолиз 37
2.4 Фотолиз -кристаллинов в присутствии KNA и антиоксидантов 38
2.5 Электрофорез 38
2.6 Очистка и ферментативный гидролиз модифицированных белков хрусталика 39
2.7 Масс-спектроскопические измерения 39
2.7.1 Масс-спектрометрический анализ с использованием электроспрейной ионизации в сопряжении с ВЭЖХ 39
2.7.2 Масс-спектрометрический анализ с использованием матрично-активированной лазерной десорбцией/ионизацией 40
Глава 3 Оптические и флуоресцентные свойства составляющих хрусталика человека 42
3.1. Оптические свойства белковых и метаболомной фракций хрусталика 43
3.2 Флуоресценция белковых и метаболомной фракций хрусталика 47
3.3 Заключение главы 53
Глава 4 Фотохимические свойства продуктов термолиза кинуренина, кинуреновой кислоты и желтого кинуренина 55
4.1 Результаты стационарных измерения для KNA и KNY 56
4.1.1 Спектры оптического поглощения 56
4.1.2 Стационарные спектры флуоресценции 57
4.1.3 Стационарный фотолиз 60
4.2 Результаты кинетических измерения для KNA и KNY 62
4.2.1 Флуоресцентные измерения 62
4.2.2 Наносекундный лазерный импульсный фотолиз 64
4.3 Фотохимические свойства KNA 70
4.4 Фотохимические свойства KNY 71
4.5 Заключение главы 76
Глава 5 Влияние вязкости среды на фотохимические свойства УФ-фильтров и их продуктов 78
5.1. Фотолиз KNA 79
5.2 Фотолиз KNY 80
5.3 Заключение главы 85
Глава 6 KNA-сенсибилизированный фотолиз альфа-кристаллина в анаэробных условиях 86
6.1 Фотолиз альфа-кристаллинов с присутствием KNA 87
6.2 Фотоиндуцированные модификации альфа-кристаллинов 89
6.2.1 Спектры поглощения и флуоресценции модифицированных белков 89
6.2.2 Анализ изображений полиакриламидных гелей 92
6.3 Масс-спектрометрический анализ пептидов 97
6.3.1 Деградация альфа-кристаллина в процессе облучения с KNA 97
6.3.2 Анализ продуктов сенсибилизированного KNA фотолиза альфа-кристаллинов 99
6.4 Механизм взаимодействия фотовозбужденной KNA с альфа-кристаллином 103
6.5 Заключение главы 106
Заключение 108
Выводы 109
Список используемых сокращений 112
Список литературы 114
