Введение
Обзор литературы 8
Взаимодействия растений с патогенами 8
Умолкание генов 9
Умолкание генов - механизм регуляции, характерный для эукариот 9
Инициация RS, функции днРНК 10
Системное распространение RS 12
Стадии ПТУГ 13
Общая схема деградации РНК в xoneRS 13
Клеточные белки, принимающие участие в RS 15
Роль RS у различных организмов 20
Супрессия умолкания генов вирус-специфическими белками 21
Супрессия RS - свойство вирусов, инфицирующих различные организмы
Вирусы растений, способные подавлять ПТУГ 23
Обнаружение вирусных супрессоров ПТУГ 25
Супрессор ПТУГ потивирусов 26
Супрессоры ПТУГ кукумовирусов 34
Супрессоры ПТУГ полеровирусов 37
Супрессоры ПТУГ клостеровирусов 39
Супрессор ПТУГ пеклувирусов 41
Супрессор ПТУГ Х-вируса картофеля 43
Супрессоры ПТУГ томбусвирусов 45
Белок оболочки - супрессор ПТУГ кармовирусов 50
Супрессоры ПТУГ геминивирусов 52
Супрессоры ПТУГ тоспо- и тенуивирусов 53
Разнообразие супрессоров ПТУГ вирусов растений 55
Супрессия ПТУГ и дальний транспорт вирусов 56
Гордеивирусы 57
Организация генома представителей рода Hordeivirus 57
Цистеин-богатые белки yb гордеивирусов 59
Материалы и методы 63
Реактивы 63
Ферменты и наборы 63
Векторы для клонирования и бактериальные штаммы 64
Трансформация бактериальных клеток Е. coli плазмидной ДНК 64
Выделение плазмидной ДНК из клеток Е. coli 65
Экспрессия рекомбинантных белков в клетках Е. coli 66
Трансформация бактериальных клеток A. tumefaciens плазмидной ДНК... 66
Выделение плазмидной ДНК из клеток A. tumefaciens 67
Электрофорез в агарозном геле 68
Извлечение фрагментов ДНК из агарозы 68
Расщепление ДНК рестрикционными эндонуклеазами 68
Дефосфорилирование плазмидной ДНК 69
Затупление концов фрагментов ДНК 69
Лигирование фрагментов 69
Секвенирование ДНК 69
Амплификация фрагментов ДНК с помощью
полимеразной цепной реакции (ПНР) 7»
Транскрипция in vitro 70
Иммунодетекция белков 71
Приготовление тотальных препаратов РНК 72
Блот-гибридизация РНК 72
Растительный материал 76
Инокуляция растений 76
Агроинфильтрация 76
Детекция GFP в растениях N. benthamiana 77
Иммуно-ферментный анализ 77
Получение рекомбинантных плазмид 77
Результаты 83
Изучение влияния экспрессии белка yb ПЛВМ на развитие инфекции ВШМЯ 83
Замена белка yb ВШМЯ на соответствующий белок ПЛВМ приводит к фенотипу "recovery" 85
Изучение влияния экспрессии гена yb ПЛВМ на накопление вирусных белков и РНК ВШМЯ 89
Развитие вирусной инфекции ВШМЯ, несущего делецию генауЬ 91
Белок Нс-Рго А-вируса картофеля комплементирует функцию дальнего транспорта белка yb ВШМЯ 94
Белок Нс-Рго усиливает симптомы инфекции ВШМЯ 95
Белок Нс-Рго подавляет развитие фенотипа "recovery" 96
Экспрессия белков yb ВШМЯ и ПЛВМ в геноме Х-вируса картофеля 97
Способность белков yb ВШМЯ и ПЛВМ подавлять ПТУГ при «перекрестной защите» 99
Способность белков yb ВШМЯ и ПЛВМ подавлять ПТУГ при временной экспрессии генов в клетках N. benthamiana 103
Мутагенез белка yb ПЛВМ 108
Экспрессия мутантных белков yb ПЛВМ в геноме Х-вируса картофеля... 110
Изучение влияния мутаций в белке yb ПЛВМ на его способность подавлять ПТУГ 111
Обсуждение 114
Выводы 122
Список литературы
