Введение
Обзор литературы 12
Сперматогенез у D.melanogaster 12
Сигнальный путь JAK-STAT 15
Сигнальный путь BMP 18
Cигнальный путь Headgehog 21
Сигнальный путь EGFR 23
Инсулиновый сигнальный путь 26
Трансляционная репрессия 27
Взаимодействие сигнальных путей 27
Ассиметричное деление и репрограммирование герминальных клеток 29
DEAD-бокс содержащие РНК-хеликазы 30
Общие сведения 30
Структурные характеристики DEAD-бокс содержащих РНК-хеликаз 31
Биохимическая активность DEAD-бокс содержащих РНК-хеликаз 32
Функциональные особенности DEAD-бокс содержащих РНК-хеликаз 34
Подсемейства DEAD-бокс содержащих РНК-хеликаз 37
Функции белков DDX3 39
Ядерный экспорт 40
Транскрипция 40 Трансляция 41
Формирование РНП-гранул 42
Регуляция клеточного цикла 42
Туморогенез 43
Belle - представитель подсемейства DDX3 у Drosophila 45
Заключение 47
Материалы и методы 49
Линии Drosophila melanogaster и клетки, использованные в работе 49
Иммунофлуоресцентное окрашивание препаратов целых семенников 50
Анализ клеточной смерти при помощи метода TUNEL 50
Конфокальная микроскопия 51
Подсчет среднего объёма ядер 51
Анализ личиночных гонад 52
Получение лизатов для электрофореза и Вестерн-блот анализа 52
Электрофорез в полиакриламидном геле (метод Лэммли) и Вестерн-блот-анализ 52
Антитела, использованные в работе 54
Получение кДНК при помощи метода обратной транскрипции 55
ПЦР в реальном времени 55
Получение антител к Belle 56
PAT-анализ длины поли-А хвостов мРНК 57
Проведение теста на фертильность 58
Результаты 59
РНК-хеликаза Belle необходима для поддержания герминальных клеток в семенниках Drosophila 59
Поддержание соматических клеток в семенниках мух с мутацией bel 64
РНК-хеликаза Belle необходима как внутриклеточный фактор для поддержания герминальных клеток 70
Потеря герминальных клеток происходит в результате клеточной гибели 75
РНК-хеликаза Belle необходима для поддержаниягерминальных клеток в личинках Drosophila 78
Уровень митотических циклинов падает в гонадах мух с мутацией bel 81
Эктопическая экспрессия циклина В, но не циклина А, приводит к восстановлению сперматогенеза на
фоне герминального нокдауна bel 85 Обсуждение 89
Выводы 97
Список цитируемой литературы 98
Благодарности 117
