Введение
1. Актуальные аспекты изучения иксодовых и аргасовых клещевых боррелиозов; проблемы лабораторной диагностики
1.1 Боррелии
1.1.1 Таксономия
1.1.2 Морфология
1.1.3 Организация генома
1.1.4 Белки OspA и Р83/100 боррелии комплекса В. burgdorferi s.l.
1.2 Экология и эпидемиология
1.2.1 Экология боррелии переносимых клещами
1.2.2 Эпидемиология
1.3 Молекулярные механизмы патогенеза
1.4 Патогенез
1.4.1 Иксодовые клещевые боррелиозы
1.4.2 Аргасовые клещевые боррелиозы
1.5 Диагностика боррелиозов
1.5.1 Прямые методы
1.5.2 Серологические методы
2. Экспериментальная часть (материалы и методы)
2.1 Реактивы и материалы
2.1.1 Реактивы
2.1.2 Синтетические олигонуклеотиды
2.1.3 Буферы и основные растворы
2.1.4 Бактериальные штаммы и коньюгаты
2.1.5 Образцы крови больных
2.1.6 Клещи I. persulcatus и образцы крови мелких млекопитающих
2.1.7 Базы данных и программы
2.2 Методы
2.2.1 Изоляция боррелии от таежных клещей на среде BSK-H
2.2.2 Изоляция боррелии на среде BSK-H из крови больных
2.2.3 Вьщелсние нуклеиновых кислот из различных биологических источников
2.2.4 Амплификация фрагментов ДНК
2.2.5 Анализ полиморфизма длин фрагментов рестрикции ПЦР фрагментов (ПДФР)
2.2.6 Подготовка ПЦР-фрагментов для проведения определения нуклеотидных последовательностей
2.2.7 Очистка продуктов реакции секвенирования ДНК
2.2.8 Определение нуклеотидных последовательностей
2.2.9 Филогенетический анализ
2.2.10 Денатурирующий электрофорез белков в SDS-ПААГ
2.2.11 Иммуноблот анализ 58
2.2.12 Выявление антител в реакции непрямой иммунофлуоресценции (РНИФ) 58
2.2.13 Статистический анализ 59
3. Результаты и обсуждение 60
3.1 Выявление боррелий комплекса В. burgdorferi s.l. в образцах от клещей /. persulcatus, крови мелких млекопитающих и людей 60
3.1.1 Выявление ДНК боррелий комплекса В. burgdorferi s.l. в крови больных, госпитализированных с признаками инфекционных заболеваний и присасыванием клещей в анамнезе 60
3.1.2 Выявление ДНК боррелий комплекса В. burgdorferi s.l. в крови мелких млекопитающих 62
3.1.3 Выявление ДНК боррелий комплекса В. burgdorferi s.l. в образцах от клещей I persulcatus 63
3.1.4 Изоляция боррелий от клещей I. persulcatus методом культивирования в искусственной среде 64
3.2 Выявление ДНК В. miyamotoi в образцах из Новосибирской области 67
3.2.1 Выявление ДНК В. miyamotoi в образцах от клещей I. persulcatus и крови мелких млекопитающих 67
3.2.2 Выявление ДНК В. miyamotoi в крови лихорадящих больных 69
3.2.3 Изоляция боррелий из крови лихорадящих больных 71
3.2.4 Анализ нуклеотидных последовательностей В. miyamotoi 71
3.3 Установление видовой принадлежности боррелий комплекса В. burgdorferi s.l. 74
3.3.1 В. burgdorferi s.l. с типичной последовательностью межгенного спейсера 74
3.3.2 В, burgdorferi s.l. с нетипичной последовательностью межгенного спейсера 81
3.4 Молекулярно-генетический анализ генов, кодирующих иммунодоминантные белки OspA и Р83/100 85
3.4.1 Молекулярно-генетический анализ гена ospA 85
3.4.2 Молекулярно-генетический анализ генар83/100 94
3.5 Сравнительный анализ генов р83/100 и ospA 102
3.6 Выявление антител к белкам боррелий комплекса В. burgdorferi s.l. в крови людей, заболевших после присасывания клещей 111
3.6.1 Сравнение выявления ДНК боррелий комплекса В. burgdorferi s.l. и противоборрелиозных антител в крови больных с эритемной формой ИКБ 114
3.6.2 Сравнение выявления противоборрелиозных антител в крови больных с КЭ и лихорадочными состояниями, развившимися после присасывания клещей 117
3.6.3 Иммуноблот анализ 120
-Заключение 125
-Выводы 130
-Список литературы 131
