Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 11
1.1 Вирус гриппа 11
1.1.2 Цикл размножения вируса гриппа 12
1.1.3 Функции белков 14
1.1.4 Генетическая изменчивость вируса гриппа 17
1.2 Живые гриппозные вакцины 19
1.2.1 Инактивированные вакцины 19
1.2.2 Живые гриппозные вакцины 20
1.2.3 История вопроса 21
1.2.4 Холодоадаптированные вакцины 22
1.2.5 Классический метод получения ЖГВ 28
1.3 Обратная генетика 30
1.3.1 История вопроса 30
1.3.2 Создание живых гриппозных вакцин (ЖГВ) 35
ГЛАВА 2. Материалы и методы. 38
2.1 Материалы... 38
2.1.1 Реактивы. 38
2.1.2 Лабораторные штаммы вирусов . 38
2.1.3 Клеточные линии и куриные эмбрионы. 39
2.1.4 Плазмиды 39
2.2 Методы 39
2.2.1 Получение реассортантов. 39
2.2.2 Определение инфекционного титра вирусов в ЭИД50 и накопление вирусов для последующих опытов. 40
2.2.3 Концентрирование вирусов. 40
2.2.4 Оценка патогенности вирусов для мышей 41
2.2.5 Определение защитной эффективности ХА реассортантов... 42
2.2.6 Оценка нейровирулентности вирусов для мышей. 42
2.2.7 Реакция задержки гемагглютинации 42
2.2.8 Выделение вирионной РНК 42
2.2.9 Получение ПЦР-продуктов для последующего секвенирования 43
2.2.10 Подбор праймеров для последующего секвенирования. 43
2.2.11 Очистка ПЦР-продуктов 44
2.2.12 Секвенирование. 44
2.2.13 Компьютерное обеспечение 45
2.2.14 Подготовка компетентных клеток. 45
2.2.15 Вставка необходимых генов в плазмиды. 45
2.2.16 Выделение макси количеств плазмидной ДНК 47
2.2.17 Трансфекция клеток плазмидами 48
ГЛАВА 3. Результаты 49
3.1 Изучение фенотипа реассортантов между ХА штаммом A/Краснодар/101/35/59(H2N2) и эпидемическими штаммами 49
3.2 Изучение роли отдельных генов ХА штамма А/Краснодар/101/35/59(Н2N2) в поддержании его ts, ca и att фенотипа на основе реассортантов, полученных методом обратной генетики 60
ГЛАВА 4.Обсуждение. 72
4.1 Изучение фенотипа реассортантов между ХА штаммом A/Краснодар/101/35/59(H2N2) и эпидемическими штаммами 72
4.2 Изучения роли отдельных генов ХА штамма А/Краснодар/101/35/59(Н2N2) в поддержании его ts, ca и att фенотипа на основе реассортантов, полученных методом обратной генетики 75
Выводы 78
Благодарности 79
Список литературы 80
