Введение
2. Литературный обзор 10
2.1. Генетические перестройки в онтогенезе эукариот 10
2.1.1. Особенности структуры генома и его изменчивость 10
2.1.2. РОЛЬ мобильных генетических элементов в изменчивости генома 13
2.1.3. Изменения генома в генеративных и соматических клетках, необходимые для нормального онтогенеза 14
2.1.4. Генетические перестройки, имеющие значение в адаптации и видообразовании 17
2.1.5. Изменения в генетическом аппарате клетки при наследственных и спорадических заболеваниях 18
2.2. ПЦР-фингерпринт как метод для изучения геномного полиморфизма. Варианты метода 21
2.2.1. IRS-ПЦР 22
2.2.2. АР-ПЦР 24
2.2.3. RAPD-ПЦР 26
2.3. Особенности канцерогенеза, изучаемые с помощью ПЦР-фингерпринта 29
2.3.1. Молекулярно-генетические маркеры злокачественного роста 30
2.3.2. Прогрессия опухолей и прижизненный анализ 31
2.3.3. Выявление активности онкогенов 33 2.3.4.Генные и хромосомные перестройки 33 2.3.5.Выявление потери гетерозиготности генов-супрессоров опухолевого роста 34
2.3.6. Идентификация генов 35
2.3.7. Неспецифические геномные перестройки. Микросателлитная нестабильность 36
2.4. Сохранение способности опухолевых клеток к дифференцировке при разных условиях их пролиферации 38
2.5. Роль апоптоза при злокачественной трансформации клетки и прогрессии опухолей 41
2.5.1. Апоптоз при нормальном развитии организма 41
2.5.2. Апоптоз при злокачественном росте и генетическая вариабельность опухолевых клеток 45
2.5.3. Фунционирование системы Fas-peuemop при взаимодействии опухолевых клеток с иммунной системой 47
3. Материал и методы 50
3.1.Материал 50
3.1.1. Опухолевые клеточные линии 50
3.1.2. Линейные мыши 50
3.2. Методы 51
3.2.1. Выделение высокомолекулярной ДНК 51
3.2.2. RAPD-ПЦР 51
3.2.3. Индукция дифференцировки опухолевых клеток и морфологическое исследование опухолей 52
3.2.4. Взаимоиндукция апоптоза опухолевыми клетками и лимфоцитами 53
3.2.5. Выявление апоптоза опухолевых клеток и спленоцитов 53
3.2.6. Выделение тотальной РНК 55
3.2.7. Обратно-транскриптазная полимеразная цепная реакция 56
3.2.8. Секвенирование ПЦР-фрагментов 59
4. Результаты 60
4.1. Полиморфизм амплифицированных фрагментов ДНК в клетках клонов гепатомы мыши МГ-22а, выявленный методом RAPD-ПЦР 60
4.2. Характеристика генетической структуры популяции опухолевых гепатоцитов МГ-22а 61
4.3. Жизнеспособность клонов гепатомы МГ-22а с разной степенью генетической изменчивости 64
4.4. Морфологические характеристики опухолей, выросших в ПСТ и ПКГ 66
4.5. Полиморфизм амплифицированных фрагментов ДНК в клетках клонов гепатомы мыши МГ-22а, выявленный методом RAPD-ПЦР, при разных условиях культивирования in vivo 70
4.6. Определение нуклеотидной последовательности амплифицированного фрагмента ДНК 77
4.7. Взаимоиндукция апоптоза в клоповых линиях гепатомы МГ-22а и саркомы J-774 мыши и сингенными спленоцитами 79
4.8. Генетическая гетерогенность и взаимоиндукция апоптоза опухолевых гепатоцитов МГ-22а и спленоцитов 82
4.9. Экспрессия Fas и FasL в популяциях и клонах клеточных линий МГ-22а и J-774 мыши in vitro 83
4.10. Экспрессия Fas и FasL в опухолевых гепатоцитах МГ-22а, гистиоцитах J-774 и сингенных спленоцитах при их пассировании in vivo 86
4.11. Экспрессия Fas и FasL в опухолевых гепатоцитах МГ-22а, гистиоцитах J-774 и сингенных спленоцитах при их совместном культивировании in vitro 89
4.12. Способность к апопотозу и экспрессия Fas и FasL в опухолевых клетках МГ-22а и J-774 и сингенных спленоцитах при их совместном культивировании in vitm 93
5. Обсуждение 94
Выводы 127
Литература 128
