СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ ....................................................................... 5
ВВЕДЕНИЕ ................................................................................................................................... 7
Актуальность исследования ........................................................................................................ 7
Цели и задачи исследования ........................................................................................................ 9
Научная новизна ......................................................................................................................... 10
Научно-практическая ценность ................................................................................................. 10
Основные положения, выносимые на защиту ......................................................................... 10
Личный вклад автора ................................................................................................................. 11
Степень достоверности и апробация результатов ................................................................... 11
Публикации ................................................................................................................................. 12
Структура и объем работы ........................................................................................................ 12
Благодарности ............................................................................................................................. 12
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ .......................................................................................................... 14
1.1. Разнообразие систем определения пола ........................................................................ 14
1.2. Состав половых хромосом .............................................................................................. 17
1.3. Многообразие генов, определяющих пол ..................................................................... 20
1.4. Деградация половых хромосом ...................................................................................... 23
1.5. Методы идентификации и исследования половых хромосом..................................... 26
1.6. Цитогенетические и геномные исследования рептилий .............................................. 29
1.6.1. Инфраотряд игуанообразные ...................................................................................... 34
1.6.2. Инфраотряд гекконообразные .................................................................................... 35
1.7. Заключение по обзору литературы ................................................................................ 37
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ................................................................ 38
2.1. Материалы ........................................................................................................................ 38
2.2. Праймеры ......................................................................................................................... 38
2.3. Животные ......................................................................................................................... 38
2.4. Клеточные культуры ....................................................................................................... 38
2.5. Приготовление суспензий фиксированных метафазных клеток ................................ 39
2.6. С-окрашивание с использованием флуоресцентных красителей ............................... 40
2.7. Выделение ДНК ............................................................................................................... 40
2.8. Получение специфичных хромосомных ДНК-библиотек ........................................... 41
2.9. ПЦР-картирование Y-специфичных RAD-seq маркеров C. calyptratus ..................... 41
3
2.10. Получение зондов для FISH на основе хромосомоспецифичных ДНК-библиотек …………………………………………………………………………………………41
2.11. Получение зондов, содержащих сатДНК, гены рибосомной РНК и теломерные повторы ....................................................................................................................................... 42
2.12. Флуоресцентная гибридизация in situ ........................................................................ 43
2.13. Секвенирование и анализ данных .............................................................................. 44
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ........................................................................................................................ 47
3.1. Генетический состав половых хромосом заборной малахитовой игуаны (Sceloporus malachiticus, SMA) ...................................................................................................................... 47
3.1.1. Цитогенетический анализ кариотипа S. malachiticus и получение ДНК-библиотек, специфичных для половых хромосом ...................................................................................... 47
3.1.2. Сравнительный анализ данных секвенирования ДНК-библиотек S. malachiticus ...................................................................................................................................................... 48
3.1.3. Идентификация и локализация последовательностей сатДНК, специфичных для половых хромосом S. malachiticus ............................................................................................ 50
3.2. Поиск предполагаемых половых хромосом йеменского хамелеона (Chamaeleo calyptratus, CCA) и анализ их генетического состава ............................................................. 57
3.2.1. Идентификация предполагаемых половых хромосом C. calyptratus .................. 57
3.2.2. Сравнительный анализ данных секвенирования ДНК-библиотек C. calyptratus 58
3.2.3. Идентификация и локализация последовательностей сатДНК в геноме C. calyptratus .................................................................................................................................... 60
3.3. Генетический состав половых хромосом юкатанского полосатого геккона (Coleonyx elegans, CEL) и центральноамериканского геккона (Coleonyx mitratus, CMI) ..................... 62
3.3.1. Цитогенетическое сравнение половых хромосом C. elegans и C. mitratus ......... 62
3.3.2. Сравнительный анализ данных секвенирования ДНК-библиотек, специфичных половым хромосомам C. elegans ............................................................................................... 64
3.3.3. Идентификация и локализация последовательностей сатДНК, специфичных для половых хромосом C. mitratus ................................................................................................... 65
4. ОБСУЖДЕНИЕ ...................................................................................................................... 72
4.1. Половые хромосомы представителей инфраотряда игуанообразные (Iguania) ........ 72
4.1.1. Заборная малахитовая игуана (Sceloporus malachiticus) ....................................... 72
4.1.2. Йеменский хамелеон (Chamaeleon calyptratus) ..................................................... 74
4.2. Половые хромосомы представителей инфраотряда гекконообразные (Gekkota) ..... 77
5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ ...................................................................................................................... 81
ВЫВОДЫ .................................................................................................................................... 82
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ .......................................................................................................... 83
ПРИЛОЖЕНИЕ 1 ..................................................................................................................... 103
ПРИЛОЖЕНИЕ 2 ..................................................................................................................... 109
ПРИЛОЖЕНИЕ 3 ..................................................................................................................... 122
