Введение
1 Общая характристика работы 5
2 Обзор литературы Гетерохроматин D. melanogaster и эффект положения генов. 9
2-1 Гетерохроматин Х-хромосомы Drosophila melanogaster. 9
2-1-1 Цитологическая характеристика, 9
2-1-2 Компоненты гетерохроматина Х-хромосомы. 11
2-1-3 Генетические локусы Х-хромосомы. 13
2-2 Эффект положения мозаичного типа. 19
2-2-1 Временная регуляция и тканевая специфичность инактивации. 20
2-2-2 Интенсивность эффекта положения зависит от размера цис-действующего гетерохроматинового блока . 21
2-2-3 Эффект положения может быть обусловлен взаимодействием разобщенных блоков гетерохроматина. 22
2-2-4 Модификаторы эффекта положения. 24
2-2-5 Классификация генов-модификаторов эффекта положения. 25
2-2-6 Модели инактивации при эффекте положения. 36
2-2-7 Эффект положения гетерохроматиновых генов. 39
2-2-8 Инактивация гена-репортера в трансгенных конструкциях. 41
2-3 Роль структуры хроматина в регуляции экспрессии генов. 43
2-3-1 Перемоделирование нуклеосом. 43
2-3-2 Модификация ги стонов. 44
2-3-3 Замещение гистонов, 46
2-3-4 Инсуляторы. 47
2-3-5 Роль РНК в экспрессии генов и создании структуры хроматина. 49
3 Материалы и иетоды 51
3-1 Линии d.melanogaster и скрещивания 51
3-1-1 Линии с модификаторами эффекта положения 51
3-1-2 Линии с хромосомными перестройками 51
3-1-3 Скрещивания для оценки влияния модификаторов эффекта положения . 52
3-1-4 Линии и скрещивания для картирования Х-ЛВО 55
3-1 -5 Линии для картирования мутации glass-like 56
3-1-6 Линии с трансгенными конструкциями на основе Р-элемента 59
3-2 Молекулярные методы 59
3-2-1 Выделение ДНК из имаго D.melanogaster 59
3-2-2 Рестрикция ДНК 60
3-2-3 Гель-электрофорез ДНК 60
3-2-4 Включение метки в ДНК (метод случайной затравки) 60
3-2-5 Саузери-гибридизация 61
4 Результаты и обсуждение 62
4-1 Исследование транс-действия модификаторов на эффект положения в серии эу гетерохроматических перестроек D. melanogaster. 62
4-1-1 Структуры перестроек (Tolchkov et ai. 2000). 63
4-1-2 Анализ влияния модификаторов эффекта положения на инактивацию гена wapl в эу- гетерохроматиновых инверсиях и транслокациях . 64
4-2 Исследование эффекта положения гена wapl в нехватках, удаляющих фрагменты дистального гетерохроматина Х-хромосомы. 68
4-3 Сулрессор Su-var(3)RT оказывает особенно сильное влияние на инактивацию определяемую взаимодействием разобщенных фрагментов гетерохроматина, 72
4-4 Картирование гетерохроматинового локуса Х-АВО. 75
4-4-1 Молекулярная характеристика нехваток, использованных для картирования Х-АВО. 11
4-4-2 Оценка эффекта делеций дистального Х-гетерохроматина на плодовитость самок, несущих мутацию abo. 81
4-4-3 Локус Х-АВО удален в делеций Df(l) 1-1. 83
4-4-4 Большая часть регулярных тандемных повторов Stellate находится дистальнес области Х-АВО. 84
4-4-5 Гетерохроматиновый локус Х-АВО может частично перекрываться с районом повторов SCLR. 84
4-4-6 Обсуждение результатов картирования Х-АВО. 86
4-5 Поиск модификаторов инактивации репортерного гена mini-white, вызываемой гетерохроматиновыми повторами Stellate. 90
4-6 Получение мутации glass-like (gl-l). 92
4-7 Картирование мутации gl-l 94
4-7-1 Рекомбипационное картирование мутации gl-l. 96
4-7-2 Делеционное картирование мутации gl-l. 98
4-7-3 Тест на комплементацию. 98
4-8 Влияние мутации glass-like на экспрессию трансгенов. 99
4-8- 1 Мутация gl-l подавляет экспрессию mini-white в конструкциях, содержащих гетерохроматиновые повторы . 99
4-8-2 Эффект мутации gl-l на экспрессию трансгенного mini-white зависит от места
встройки конструкции в геном. 103
4-8-3 Мутация gl-l не влияет на экспрессию white при эффекте положения. 103
4-8-4 Мутация gl-l не влияет на экспрессию white с энхансером, окруженного инсуляторами. 104
4-8-5 Обсуждение возможной функции glasslike. 105
4-8-6 Перспективы исследования мутации glass-like. 107
4-9 Заключение 108
Выводы по
Приложение 1 113
Приложение 2 114
Список литературы 115
Благодарности 125
