Введение
Глава 1. Обзор литературы .6
1.1 Систематическое положение и характеристика видов рода Pleurotus .6
1.2 Концепция вида у грибов .10
1.3 Половое размножение высших базидиальных грибов и структура генов, участвующих в
процессе половой совместимости .17
Глава 2. Материалы и методы .29
2.1 Объекты исследования .29
2.2 Культивирование штаммов вешенки 33
2.3 Получение плодовых тел в лабораторных условиях 33
2.3.1 Получение плодовых тел и споровых отпечатков на чашках Петри 33
2.3.2 Выгонка плодовых тел 33
2.4 Получение тестерных штаммов 36
2.5 Выделение ДНК, амплификация и анализ ITS последовательностей 37
2.5.1 Выделение геномной ДНК .37
2.5.2 Амплификация ITS последовательностей на матрице геномной ДНК 38
2.5.3 Секвенирование нуклеотидных последовательностей и анализ данных .38
2.5.4 Баркодинг на основе рестрикционного анализа ITS последовательностей .39
2.6 Биоинформатический анализ структуры matA локусов половой совместимости у представителей рода Pleurotus 40
2.7 Клонирование генов matA локуса .40
2.7.1 Вектор для клонирования и штаммы использованных микроорганизмов 40
2.7.2 Выделение ДНК .41
2.7.3 Приготовление компетентных клеток и трансформация 41
2.7.4 Амплификация и клонирование hd генов гомеодоменных белков 42
Глава 3. Результаты и обсуждение .45
3.1 Культивирование видов рода Pleurotus в лабораторных условиях .45
3.2 Филогенетический анализ видов рода Pleurotus .53
3.2.1 Оценка «надежности» ITS последовательностей видов рода Pleurotus в ГенБанке 53
3.2.2 Филогенетический анализ видов рода Pleurotus 54
3.2.3 Анализ эволюционных расстояний между видами рода Pleurotus 61
3.3. Анализ половой совместимости в пределах комплексных видов рода Pleurotus. Мон-мон скрещивания 62
3.3.1 Анализ половой совместимости между видами P. cajor-caju и P. pulmonarius 63
3.3.2 Анализ половой совместимости между представителями вида P. cornucopiae 66
3.3.3 Анализ репродуктивной изоляции между коммерческими и природными штаммами P. ostreatus .68
3.3.4 Уточнение видового статуса и разрешение «спорных» видов рода Pleurotus 70
3.4 Баркодинг видов рода Pleurotus 72
3.5 Анализ генов половой совместимости у представителей рода Pleurotus 81
3.5.1 Структура matA локуса половой совместимости .81
3.5.2 Клонирование генов matA локуса P. ostreatus 90
Глава 4. Заключение 99
Выводы 103
Список литературы 104
Благодарности 119
Приложения .120
