Введение
ГЛАВА 1. ДНК- ГЕНОМНЫЕ ВИРУСЫ РАСТЕНИЙ: ТАКСОНОМИЯ, СВОЙСТВА, ДИАГНОСТИКА (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ) 7
1.1. Общая характеристика вирусов рода Caulimovirus семейства Caulimoviridae
1.2. Вирус мозаики цветной капусты - типовой представитель рода Caulimovirus 8
1.3. Характеристика репликации и изменчивости вирусного генома 20
1.4. Модельные системы для изучения ВМЦК 27
1.5. Использование генома ВМЦК в генетической инженерии 29
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 33
2.1. ВМЦК и его изоляты 33
2.2. Способы передачи вируса 34
2.3. Световая и электронная микроскопия 34
23.1. Изучение внутриклеточных вирусных включений методом световой микроскопии 34
2.3.2. Негативное контрастирование частиц ВМЦК для электронномикроскопического исследования 34
2.3.3. Ультратонкие срезы 35
2.4. Получение каллусной ткани цветной капусты 35
2.5. Очистка ВМЦК 35
2.6. Получение поликлональных моноштаммовых антисывороток 36
2.7. Реакция двойной иммунодиффузии 37
2.8. Методы выделения ДНК 37
2.9. Электрофорез структурных белков в ПААГ 39
2.10. Анализ ДНК электрофорезом в акриламидном и агарозном гелях 40
2.11. Полимеразная цепная реакция 41
2.12. Рестрикционный анализ ДНК 41
2.13. Синтез нерадиоактивных ДНК-зондов 42
2.14. Блот-гибридизация ДНК 43
ГЛАВА 3. ХАРАКТЕРИСТИКА ДАЛЬНЕВОСТОЧНОГО ШТАММА ВМЦКо 44
3.1. Цитологические и ультраструктурные особенности инфицированных ВМЦКо клеток 44
3.2. Физико-химическая характеристика ВМЦКо 47
3.2Л. Подбор методики получения препарата ВМЦК 47
3.2.2. Структурные полипептиды ВМЦКо 55
3.2.3. Характеристика нуклеиновой кислоты ВМЦКо 56
3.3. Антигенная характеристика капсидных белков ВМЦКо и выявление штаммо-, видо- и родоспецифических эпитопов ВМЦК и ВМГ 58
ГЛАВА 4. РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ ВМЦК НА ОСНОВЕ АНАЛИЗА ЕГО ГЕНЕТИЧЕСКОЙ ИЗМЕНЧИВОСТИ 60
4.1. Амплификация ГБЦВ дальневосточных изолятов ВМЦК 60
4.2. Анализ генетической изменчивости ВМЦК 64
4.3. ПЦР диагностика ВМЦК , 69
4.4. Диагностика ВМЦК с помощью ДНК-гибридизации 71
ГЛАВА 5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ 74
ВЫВОДЫ 90
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ .92
