Введение
Глава 1. Обзор литературы. Структура, свойства и модуляция If/HCN канала и возможности создания биологических пейсмекеров 13
1.1. Механизмы пейсмекерной активности 13
1.2. Ионная проницаемость через If канал 24
1.3. Модуляция If канала 26
1.4. Биологические пейсмекеры и эмбриональные стволовые клетки 37
1.5. Модуляция кардиогенной клеточной дифференцировки 48
Глава 2. Материалы и методы исследования 52
2.1. Электрофизиологические методы 54
2.2. Молекулярно-биологические эксперименты 61
2.3. Манипуляции с эмбриональными стволовыми клетками 74
2.4. Изоляция нативных кардиомиоцитов 82
Глава 3. Электрокардиофизиологическая характеристика кардиоспецифических HCN изоформ, экспрессированных в овариальных клетках китайских хомячков 86
3.1. Свойства HCN 1, HCN2 и HCN4 изоформ канала If в 86 модификации «вся клетка» в физиологическом растворе...
3.2. Свойства изоформ HCN 1, 2, 4 по данным метода «вся 95 клетка» в высококалиевом растворе
3.3. Сравнение электрофизиологических показателей изоформ HCN в физиологическом и высококалиевом растворах 100
3.4. Свойства кардиоспецифических HCN изоформ по данным метода «один канал» 106
Глава 4. Модуляция HCN-токов Р-субъединицей калиевых каналов MiRPl, экспрессированных в овариальных клетках китайских хомячков 113
4.1. Влияние р-субъединицы калиевого канала MiRPl на изоформу HCN1 114
4.2. Влияние Р-субъединицы калиевого канала MiRPl на изоформу HCN2 122
4.3. Влияние р-субъединицы калиевого канала MiRPl на изоформу HCN4 126
Глава 5. Прямые доказательства проведения кальция через HCN канал и человеческий нативный If ток при физиологических концентрациях кальция 133
5.1. Доказательства HCN2 канала в патче 135
5.2. Доказательства проведения кальция через HCN2 канал при экспрессии в овариальных клетках китайских хомячков 137
5.3. Кальций проницаем для If тока в нативных крысиных и человеческих кардиомиоцитах 143
5.4. HCN2 проводит кальций в присутствии Na+или К+ 148
5.5. Влияние кальция на ионную селективность и проводимость HCN канала 152
Глава 6. Электрофизиологическая и морфологическая идентификация пейсмекероподобных клеток в эмбриональных стволовых клетках мышей 158
6.1. Использование предсердного натрийуретического протеина в качестве промотора для идентификации пейсмекероподобных клеток 158
6.2. Создание эмбриональных тел и визуализация клеток с векторами 160
6.3. Иммуноблоттинг эмбриональных телец 164
6.4. Электрофизиологическая идентификация флюоресцирующих эмбриональных стволовых клеток 167
Глава 7. Влияние факторов дифференцировки эндотелина-1, ретиноевой кислоты и нейрорегулина-1 на ANP-EGFP- позитивные линии в эмбриональных стволовых клетках 176
7.1. Эндотелии-1, нейрорегулин-1 и ретиноидная кислота как факторы дифференцировки 176
7.2 Влияние эндотелина-1 на дифференцировку кардиомиоцитов в эмбриональных стволовых клетках 178
7.3 Влияние нейрорегулина-1 на дифференцировку кардиомиоцитов в эмбриональных стволовых клетках 185
7.4 Влияние ретиноевой кислоты на дифференцировку кардиомиоцитов в эмбриональных стволовых клетках 187
Глава 8. Обсуждение 191
8.1 Заключение 217
Выводы 221
Практические рекомендации 223
