Введение
Введение 4
1.1. Ароматические амиды и нитрилы 14
1.2. Биотрансформация ароматических амидов и нитрилов 15
1.3. Типы метаболизма ароматических соединений 16
1.4. Ферменты, участвующие в преобразовании нитрилов и амидов 19
1.5. Биотрансформация бензамида 27
1.6. Биотрансформация бензонитрила 27
1.7. Энантиоселективная биотрансформация ароматических амидов и нитрилов 29
1.8. Энантиоселективный гидролиз ибупрофенамида 34
1.9. Энантиоселектвный гидролиз N-ацетил- 2,3-дигидро-7,8-дифтор-3-метил-4H-1,4-бензоксазина 36
ГЛАВА 2. Объекты и методы исследования 38
2.1. Объекты исследования 38
2.2. Среды и субстраты для культивирования 41
2.3. Селекция штаммов-деструкторов ароматических амидов и нитрилов 41
2.4. Определение ростовых характеристик 42
2.5. Определение ферментативной активности 42
2.6. Изучение влияния температуры и рН на удельную активность фермента 43
2.7. Идентификация выделенных культур 44
2.8. Выделение ДНК и полимеразная цепная реакция 46
2.9. Секвенирование ДНК 47
2.11. Гидролиз ибупрофенамида 48
2.12. Гидролиз 2,3-дигидро-7,8-дифтор-3-метил-4H-1,4-бензоксазина (N – aцетилдифторбензоксазина) 49
2.13. Статистическая обработка 50
ГЛАВА 3. Изучение биологического разнообразия микроорганизмов почв и донных отложений, трансформирующих ароматические амиды и нитрилы 51
3.1. Изучение количества и соотношения гетеротротрофных аэробных бактерий почв и донных отложений 51
3.2. Отбор культур, активно трансформирующих ароматические амиды и нитрилы 55
3.3. Идентификация активных штаммов 57
3.4. Анализ генов метаболизма амидов и нитрилов у исследуемых бактерий. 68
3.5. Скрининг изолятов почвенных грибов, утилизирующих нитрилы и амиды. 73
ГЛАВА 4. Биотрансформация ароматических амидов и нитрилов 77
4.1. Изучение влияния состава среды на рост и активность бактерий 77
4.2. Изучение активности ферментов в процессе роста культуры 81
4.3. Определение температурной и рН-зависимости амидазной активности 89
4.4. Биотрансформация бензамида 91
4.5. Биотрансформация амида ибупрофена 93
4.6. Биотрансформация N-амида: N – aцетил-7,8-дифтор-2,3-дигидро-3-метил-4H-1,4-бензоксазина 100
Заключение 106
Выводы 114
Список литературы 115
