Введение
2. Обзор литературы 14
2.1. Понятие здоровье и проблема нормы в космической медицине 14
2.2. Изучение белковой композиции плазмы крови здорового человека при воздействии факторов космического полета 15
2.2.1. Изменения белков сыворотки и плазмы крови после космических полетов разной продолжительности 19
2 2 2 Изменения белков сыворотки и плазмы в экспериментах по моделированию факторов космического полета 25
2 2 2 1 Изменения белков сыворотки и плазмы крови в условиях антиортостатической гипокинезии 26
2 2 2 2 Изменения белков сыворотки и плазмы крови в условиях«сухой» иммерсии 29
2.2.2.3. Изменения белков сыворотки и плазмы крови в условиях длительной изоляции в гермообъеме 30
2.3. Протеомные методы исследования 36
2.3.1. Прямое масс-спектрометрическое профилирование 37
2.3.1.1. Технология белковых чипов SELDI-TOF 37
2.3.1.2. Технология префракционирования образцов на магнитных частицах перед MALDI-TOF масс-спектрометрией 39
2.3.1.3. Использование микрохроматографических насадок ZipTip перед прямым масс-спектрометрическим профилированием 41
2.3.1.4. Воспроизводимость технологий прямого профилирования 41
2.3.1.5. Сыворотка крови как объект для прямого протеомного профилирования 43
2.3.1.6. Идентифицированные белки масс-спектрометрических профилей сыворотки и плазмы крови 45
2.4. Пластичность протеомного профиля сыворотки крови здорового человека 50
2.5. Преимущества и недостатки прямого масс-спектрометрического профилирования 53
2.6. Возможность использования метода прямого масс-спектрометрического профилирования в оценке адаптации организма к экстремальным факторам среды 54
3. Материалы и методы исследования 57
3.1. Материалы исследования 57
3.2. Объекты исследования 57
3.3. Циклограмма получения образцов крови и описание экспериментов по моделированию факторов космического полета 59
3.3.1. Длительные космические полеты 59
3.3.2. 1-суточная антиортостатическая гипокинезия (-15) суточная «сухая» иммерсия 59
3.3.4. 105-суточная изоляция в гермообъеме 60
3.3.5. 9-суточная изоляция в условиях гипербарической кислородно-азотно-аргоновой среды 61
3.3.6 Исследование групповой вариабельности протеомного профиля сыворотки крови 61
3.3.7. Исследование индивидуальной вариабельности протеомного профиля сыворотки крови 61
3.4. Методы исследования 63
3.4.1. Получение проб сыворотки крови 63
3.4.2. Получение проб плазмы крови 63
3.4.3. Предобработка образцов сыворотки с использованием магнитных частиц ClinProt MB IMAC Си («Bruker Daltonics») 63
3.4.4. Предобработка образцов сыворотки с использованием магнитных частиц ClinProt MB WCX («Bruker Daltonics») 64
3.4.5. Предобработка образцов сыворотки с использованием магнитных частиц ClinProt MB WAX («Bruker Daltonics») 64
3.4.6. Префракционирование образцов сыворотки с использованием микронаконечников ZipTip С-18 65
3.4.7. Масс-спектрометрические измерения 65
3.4.8. Анализ масс-спектров 66
3.4.9. Контроль качества масс-спектров 66
3.4.10. Статистический анализ 66
3.4.11. Тандемная масс-спектрометрия и идентификация отличающихся пиков 67
4. Результаты и обсуждение 69
4.1. Оптимизация метода профилирования сыворотки крови здорового человека 69
4.1.1. Выбор объекта для прямого профилирования 69
4.1.2. Выбор воспроизводимой технологии для прямого протеомного профилирования сыворотки 72
4.2. Характеристика вариабельности низкомолекулярного субпротеома сыворотки крови здорового человека в привычных условиях жизнедеятельности 83
4.2.1. Групповая вариабельность протеомного профиля сыворотки крови 83
4.2.2 Индивидуальная вариабельность протеомного профиля сыворотки крови 89
4.3. Характеристика протеомного профиля сыворотки крови при воздействии факторов космического полета 100
4.3.1. Изменения протеомного профиля после длительных космических полетов (169-199 суток) 100
4.3.2. Изменения протеомного профиля сыворотки крови в эксперименте с 24-часовой антиортостатической гипокинезией (-15) 106
4.3.3. Изменения протеомного профиля сыворотки крови в эксперименте с 7-суточной «сухой» иммерсией 112
4.3.4. Изменения протеомного профиля сыворотки крови в эксперименте со 105-суточной изоляцией в гермообъеме 116
4.4. Изменения протеомного профиля сыворотки крови в условиях гипербарической кислородно-азотно-аргоновой среды (13,53%, 28,26%, 58,21%) 123
5. Заключение 130
6. Выводы 134
7. Практические рекомендации 135
8. Список литературы 136
