Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературных данных 8
1.1. Общие сведения о стероидных гормонах и их классификация 8
1.2. Биосинтез и метаболизм кортикостероидов. Биологические формы
и действие кортикостероидов в организме 8
1.3. Физико-химические методы исследования стероидных гормонов ... 14
1.3.1. Иммунологические методы 14
1.3.2. Хроматографические методы анализа стероидных гормонов...
1.3.2.1. Определение стероидов методом тонкослойной хроматографии 16
1.3.2.2. Газовая хроматография (ГХ) и хромато-масс-спектрометрия (ГХ-МС) при определении стероидов 17
1.3.2.3. Определение стероидных гормонов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) 18
1.3.2.3.1. Использование циклодекстринов (ЦД) в хроматографии стероидов 23
1.3.2.3.2.Методы детектирования стероидных гормонов 26
1.3.2.4. Мицеллярная жидкостная хроматография 31
1.3.3. Определение кортикостероидов методом мицеллярной
электрокинетической хроматографии (МЭКХ) 33
1.3.3.1. Поверхностно-активные вещества, используемые в МЭКХ для разделения стероидных гормонов 40
1.3.3.2. Буферные системы, используемые в МЭКХ стероидов 46
1.3.3.3. Влияние модификаторов в составе ведущего электролита на разделение кортикостероидов методом МЭКХ 48
1.4. Подготовка биологических объектов к анализу 49
1.4.1. Гидролиз коньюгатов стероидов 49
1.4.2. Методы экстракции стероидных гормонов
1.5. Биосинтез и метаболизм катехоламинов 54
1.6. Физико-химические методы исследования катехоламинов
1.6.1. Иммунологические методы определения катехоламинов 58
1.6.2. Газовая хроматография для определения катехоламинов 58
1.6.3. Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) катехоламинов 59
1.6.4. Использование метода капиллярного электрофореза (КЭ) для определения катехоламинов (КА) 60
1.6.5. Детектирование катехоламинов в ВЭЖХ и КЭ 63
1.6.6. Сравнительный анализ физико-химических методов определения катехоламинов 67
1.6.7. Пробоподготовка реальных объектов к анализу катехоламинов 68
ГЛАВА 2. Общая характеристика объектов и методов исследования 74
2.1. Аппаратура 74
2.2. Реактивы и материалы
2.2.1. Подготовка рабочих растворов 76
2.2.2. Отбор пробы 79
2.3. Методы исследования 79
2.3.1. Высокоэффективная жидкостная хроматография при определении стероидов и катехоламинов 79
2.3.2. Капиллярный электрофорез 81
2.4. Подготовка биологических объектов к анализу 84
2.4.1. Подготовка биологических объектов к анализу смесей
стероидных гормонов 84
2.4.1.1. Жидкостная экстракция 84
2.4.1.2. Твердофазная экстракция 85
2.4.1.3. Определение стероидных гормонов методом ТСХ 87
2.4.2. Оптимизация пробоподготовки при определении
катехоламинов 88
2.4.2.1. Подготовка сорбента для экстракции
катехоламинов 88
2.4.2.2. Твердофазная экстракция катехоламинов 88
ГЛАВА 3. Установление факторов, влияющих на хроматографическое (оф вэжх) и электрофоретическое {мицеллярная электрокинетическая хроматография) разделение кортикостероидов 91
3.1 Факторы, влияющие на разделение стероидов в режиме ОФ ВЭЖХ 92
3.2. Влияние добавки Р-цикло декстрина на разделение стероидных гормонов в изократическом режиме ОФ ВЭЖХ 98
3.3 Расчет констант устойчивости, образующихся комплексов между 3-циклодекстрином и стероидами 105
3.4. Сравнительная оценка жидкостной и твердофазной экстракции при определении кортикостероидов в сыворотке крови и в моче.. 109
3.5. Факторы, влияющие на разделение кортикостероидов методом мицеллярной электрокинетической хроматографии 118
3.6. Методы on-line концентрирования в МЭКХ при определении стероидных гормонов в биологических жидкостях 129
3.7. Определение стероидов в биологических объектах методом МЭКХ 139
3.8. Сопоставление полученных результатов в режиме мицеллярной электрокинетической хроматографии с методом ОФ ВЭЖХ 141
ГЛАВА 4. Определение катехоламинов методами КЭ УФ И КЭ-МС 143
4.1. Факторы, влияющие на разделение катехоламинов в капиллярном зонном электрофорезе 143
4.2. Факторы, влияющие на стабильность электрораспыления и чувствительность ESI-MS-детектирования 148
4.3. Определение катехоламинов в реальных объектах методом КЭ-МС 152
4.4. Сопоставление методов КЭ-МС и ОФ ВЭЖХ при определении катехоламинов 156
ГЛАВА 5. Практическое приложение 160
5.1. Закономерности изменения стероидных профилей при различных дисфункциях коры надпочечников 160
5.1.1. Подготовка пробы к анализу 161
5.1.2. Характеристические стероидные профили при различных дисфункциях коры надпочечников методом ОФ-ВЭЖХ 161
Приложение 170
Выводы 180
Список использованной литературы 182
