Введение
ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР 9
1.1. Промышленное Цветоводство 9
1.1.1 Хризантема 10
1.2. Размножение декоративно-цветочных культур в условиях in vitro 12
1.3. Культивирование хризантем в условиях in vitro 23
1.4. Оздоровление посадочного материала от вирусов 25
1.5. Карлавирусы 28
1.5.1. Морфология и физико-химические свойства вирусных частиц 29
1.5.2. Симптоматика и круг хозяев 33
1.5.3. Цитопатология 35
1.6. В Вирус хризантемы 35
ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3 8
2.1. Объект исследования 38
2.2. Культура изолированных тканей хризантемы 43
2.2.1. Техника культивирования in vitro 43
2.2.2. Условия культивирования 43
2.2.3. Статистическая обработка результатов 44
2.3. Выделение тотальной РІЖ из растительной ткани 44
2.3.1.Выделение тотальной растительной РНК тризольным методом 45
2.3.2. Выделение тотальной растительной РНК по модифицированному методу Хомчинского 45
2.3.3. Выделение тотальной растительной РНК на основе LiCl 46
2.4. Обратная транскрипция и полимеразная цепная реакция (RT-PCR) 47
2.5. Электрофорез нуклеиновых кислот 49
2.6. Выделение амплифицированных фрагментов из продукта PCR 49
2.7. Секвенирование продуктов PCR 50
ГЛАВА 3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 51
3.1. Методы выделения тотальной РНК 51
3.2.Идентификация В вируса хризантем методом RT-PCR 54
3.2.1.Характеристика праимеров, используемых для выявления ВВХ методом RT-PCR 54
3.2.2. Влияние концентрации РНК хризантем для обратной транскрипции на протекание RT-PCR 58
3.3. Анализ ВВХ в растениях некоторых сортов хризантем, выращиваемых в условиях теплицы 60
3.4. Анализ нуклеотидной последовательности изолята ВВХ, распространенного в растениях хризантем 64
3.5. Введение полевых клонов хризантем в культуру in vitro 67
3.5.1. Изолирование и стерилизация первичных эксплантов 67
3.5.2. Изучение морфогенетического потенциала различных эксплантов хризантем 71
3.5.3. Культивирование черенков хризантем in vitro IS
3.5.4. Зависимость микроразмножения хризантем in vitro от состава питательной среды и условий выращивания 76
3.6. Оздоровление посадочного материала от ВВХ 83
3.6.1. Схема получения оздоровленных растений хризантем 84
ВЫВОДЫ 87
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 89
