Введение
ГЛАВА 1. Иммунохимические методы анализа пестицидов 9
1.1. Основные этапы разработки иммунохимических методов анализа пестицидов
1.1.1. Дизайн и синтез гаптенов, конъюгирование гаптенов с белками 10
1.1.2. Получение антител 13
1.1.3. Тестирование антител; оптимизация иммуноанализа 13
1.2. Твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА) 15
1.2.1. Хемшгюминесцентный ИФА 18
1.3. Твердофазный ИФА в проточных системах 21
1.3.1. Иммуносорбенты и методы иммобилизации 23
1.3.2. Неспецифическое связывание в проточных системах 24
1.3.3. Стабильность реагентов в условиях проточного иммуноанализа 25
1.3.4. Регенерация иммуносорбентов 25
1.4. Поляризационный флуоресцентный иммуноанализ (ПФИА) 26
1.4.1. Влияние структуры трейсера на чувствительность ПФИА 29
ГЛАВА 2. Общая характеристика ДДТ, производных и метаболитов 30
2.1. Физико-химические свойства ДДТ и его основных производных 32
2.2. Метаболизм и транспорт ДДТ в окружающей среде 36
2.3. Метаболизм ДДТ и производных в живых организмах 38
2.4. Механизм инсектицидного действия ДДТ 39
2.5. Механизмы токсического действия ДДТ на живые организмы 40
ГЛАВА 3. Методы определения ДДТ в различных природных объектах 42
3.1. Физико-химические методы анализа ДДТ 42
3.2. Иммунохимические методы анализа ДДТ 46
ГЛАВА 4. Материалы и методы 55
4.1. Материалы и оборудование 55
4.2. Методы исследования 57
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
ГЛАВА 5. Поляризационный флуоресцентный иммуноанализ (ПФИА) ДДТ и производных 71
5.1. Получение меченых производных ДДТ 71
5.2. Тестирование моноклональных антител против ДДТ 73
5.3. Исследование специфичности ПФИА ДДТ 82
5.4. Аналитические характеристики ПФИА ДДТ 84
ГЛАВА 6. Твердофазный иммуноферментный анализ ДДТ 90
6.1. Оптимизация ИФА ДДТ 90
6.1.1. Изучение сорбционного поведения конъюгата на поверхности планшетов; исследование влияния температуры и времени проведения стадий на вид калибровочных кривых ИФА ДДТ 91
6.1.2. Исследование влияния физико-химических факторов на стадию конкуренции 97
6.1.3. Влияние органических растворителей на чувствительность твердофазного ИФА ДДТ и суммы производных ДДТ 102
6.1.4. Исследование специфичности твердофазного ИФА ДДТ 105
6.1.5. Стабильность ИФА ДДТ 107
6.2. Твердофазный ИФА ДДТ в водах различного происхождения 109
6.2.1. Твердофазный ИФА ДДТ в водопроводной и минеральной воде 109
6.2.2. Твердофазный ИФА ДДТ в поверхностных водах 111
6.3. Твердофазный ИФА ДДТ в почве и продуктах питания 116
ГЛАВА 7. Иммуноферментный анализ ДДТ в проточной системе 120
7.1. Получение и свойства носителей для ИФА ДДТ в проточной системе 120
7.2. Выбор схемы проведения иммуноферментного анализа ДДТ в проточной
системе 122
7.2.1. Конкурентная схема ИФА ДДТ в проточной системе с использованием
конъюгатов антивидовых антител с пероксидазой хрена 122
7.2.2. ИФА ДДТ в проточной системе с использованием конъюгатов
моноклональных антител с пероксидазой хрена 126
7.2.2.1. Получение и тестирование конъюгатов моноклональных антител с пероксидазой хрена методом твердофазного ИФА на планшетах 126
7.2.2.2. Тестирование конъюгатов антител против ДДТ с пероксидазой в проточной системе 128
7.3. Оптимизация условий проведения ИФА ДДТ в проточной системе 130
ВЫВОДЫ 136
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 13 8
