Введение
1. Список использованных сокращений 7
2. Введение 8
2.1. Актуальность темы исследования 8
3. Цель исследования 11
4. Задачи исследования 11
5. Научная новизна работы 12
6. Теоретическая и практическая значимость 12
7. Объем и структура диссертации 14
8. Обзор литературы
8.1. Врождённый иммунный ответ на S. flexneri 2а 15
8.2. Адаптивный иммунный ответ на S. flexneri 2а
8.2.1. Клеточно-опосредованный адаптивный иммунный ответ 21
8.2.2. Гуморальный адаптивный иммунный ответ 23
8.3. Основные подходы к разработке вакцин против S. flexneri 2а 27
8.3.1. Химические шигеллёзные вакцины 28
8.3.2. Инактивированные шигеллёзные вакцины 30
8.3.3. Живые шигеллёзные вакцины
8.3.3.1. Неинвазивные живые вакцины 32
8.3.3.2. Инвазивные живые шигеллёзные вакцины
8.3.4. Векторные шигеллёзные вакцины 36
8.3.5. Стратегии по созданию ассоциированных (мультисеротипных) шигеллёзных вакцин 36
9. Материалы и методы исследования 41
9.1. Методы получения нативного ЛПС S. flexneri 2а и его производных 41
9.1.1. Штамм кишечной бактерии 41
9.1.2. Выделение и очистка ЛПС 41
9.2. Определение химической структуры нативного ЛПС S. flexneri 2а и его производных 41
9.3. Постановка метода непрямого твёрдофазного иммуноферментного анализа для определения специфичности нЛПС S. flexneri 2а и его производных 42
9.4. Методика определения пирогенности у кроликов на введение нЛПС S. flexneri 2а и его производных 43
9.5. Определение гуморального ответа у мышей, иммунизированных образцами, содержащими нЛПС S. flexneri 2а с преобладанием короткоцепных, длинноцепных фракций или без явного преобладания какой-либо из фракций
9.5.1. Методика интраперитонеальной иммунизации мышей и отбора биоматериала 44
9.5.2. Постановка нТИФА для определения IgG и IgM у мышей, иммунизированных образцами, содержащими нЛПС
S. flexneri 2а с преобладанием короткоцепных, длинноцепных фракций или без явного преобладания какой-либо из фракций 44
9.6. Определение гуморального ответа у мышей, иммунизированных образцами с пониженными показателями пирогенности, отличающихся по содержанию ЛПС с разной длиной ПС цепи 45
9.7. Определение антител у мышей, иммунизированных образцами, содержащими д/ц ЛПС S. flexneri 2а и отличающимися по строению липида А 45
9.8. Методы, используемые для характеристики гуморального иммунного ответа у мышей (CBA x C57 Bl/6) F1,
иммунизированных образцами, содержащими преимущественно длинноцепные 3-ацильные производные ЛПС S. flexneri 2а 45
9.8.1. Методика иммунизации мышей образцом 3,4-ац д/ц мЛПС и отбора биоматериала 46
9.8.1.1. Методика интраперитонеальной иммунизации мышей образцом 3,4-ац д/ц мЛПС и отбора биоматериала 46
9.8.1.2. Методика подкожной иммунизации мышей образцом 3,4-ац д/ц мЛПС и отбора биоматериала 46
9.8.1.3. Методика интраназальной иммунизации мышей образцом 3,4-ац д/ц мЛПС и отбора биоматериала 9.8.2. Определелие сывороточных агглютинивов методом РПГА 47
9.8.3. Постановка нТИФА для характеристики изотипов и субизотипов IgG сывороточных антител и антител на слизистой у мышей (CBA x C57 B1/6) F1, иммунизированных 3,4-ац д/ц мЛПС 47
9.9. Определение протективной активности 3,4-ац д/ц мЛПС в опыте по экспериментальному заражению 48
9.9.1. Определение ИД50 и ИД100 вирулентного штамма S. flexneri 2a 1605 у морских свинок 48
9.9.2. Постановка кератоконъюнктивальной пробы 48
9.10. Определение перекрёстной активности сывороточных антител у мышей после иммунизации 3,4-ац д/ц мЛПС 49
9.10.1. Методика иммунизации мышей для определения перекрёстной активности сывороточных Ат 49
9.10.2. Оценка бактериолитических свойств мышиных сывороток 49
9.11. Клиническое исследование кандидатной вакцины против дизентерии Флекснера 2а «Флексвак» 50
9.11.1. Цель и задачи исследования кандидатной вакцины «Флексвак» 50
9.11.2. Состав исследуемого препарата 51
9.11.3. Дизайн исследования 51
9.11.4. Отбор участников исследования 52
9.11.5. График обследования и процедур у добровольцев, принявших участие в исследованиии препарата «Флексвак» 53
9.11.6. Оценка безопасности кандидатной вакцины «Флексвак» 56
9.11.7. Определение специфического иммунного ответа у добровольцев, иммунизированных препаратом «Флексвак» 57
9.11.7.1. Постановка РПГА для определения О-специфических анти-S. flexneri 2а антител в сыворотках добровольцев 58
9.11.7.2. Постановка нТИФА для определения О-специфических анти-S. flexneri 2а антител в сыворотках добровольцев 58
9.12. Методы статистической обработки полученных результатов 58
10. Результаты исследований 59
10.1. Характеристика структур ЛПС S. flexneri 2а, используемых для формирования исследовательских панелей 59
10.2. Исследование влияния структурного полиморфизма ЛПС S. flexneri 2a на его О-специфическую антигенную активность с использованием моно- и поливалентных шигеллёзных сывороток 63
10.3. Изучение условий индукции пирогенной реакции у кроликов производными нЛПС S. flexneri 2а 66
10.4. Исследование гуморального ответа у мышей к пирогенным нЛПС S. flexneri 2а, отличающихся по длине О-ПС цепи 68
10.5. Исследование гуморального ответа у мышей к низкопирогенным и апирогенным ЛПС с различной длиной цепи О-ПС 73
10.6. Изучение влияния структуры липида А на иммуногенность длинноцепного ЛПС S. flexneri 2а у мышей 75
10.7. Системный гуморальный иммунный ответ и иммунный ответ на слизистых у мышей (CBA x C57 B1/6) F1, иммунизированных длинноцепными 3-ацильные производными ЛПС S. flexneri 2а 77
10.8. Исследование протективной активности образца 3,4-ац д/ц
мЛПС S. flexneri 2а 81
10.9. Перекрёстная бактериолитическая активность сывороточных
антител мышей, полученных при иммунизации образцом
длинноцепного 3-ацильного производного ЛПС S. flexneri 2а 83
10.10. Исследование кандидатной вакцины против дизентерии Флекснера 2а с участием здоровых добровольцев, по результатам I фазы клинических исследований 85
10.10.1. Оценка безопасности кандидатной вакцины «Флексвак» 87
10.10.2. Оценка иммуногенности кандидатной вакцины «Флексвак» для добровольцев 11. Обсуждение результатов 96
12. Выводы 114
13. Список литературы
