Введение
Часть I. Обзор литературы
Глава 1. Иммунобиологическая функция кожи 20
1.1. Строение кожи 20
1.2. Вещества, влияющие на пролиферацию и дифференцировку кератиноцитов, апоптоз кератиноцитов 27
1.3. Иммунологическая функция кожи 34
1.3.1. Иммунологически активные клетки кожи 34
1.3.2. Цитокины и кожа 43
1.3.2.1. Интерлейкины 44
1.3.2.2. Интерфероны 65
1.3.2.3. Хемокины 67
1.3.2.4. Колониестимулирующие факторы 68
1.3.2.5. Факторы роста 69
1.3.2.6. Факторы некроза опухолей 72
1.4. Нейроиммунокожная система 72
Глава 2. Влияние экзогенной рнк на иммунный ответ 75
Глава 3. Псориаз. нарушения при псориазе. методы лечения псориаза 77
3.1. Этиология и патогенез псориаза 77
3.2. Патологическая пролиферация и дифференцировка кератиноцитов...78
3.3. Патогенез псориаза на клеточном уровне 79
3.4. Трансмембранные сигнальные преобразовательные системы 88
3.5. Белки острой фазы воспаления и псориаз 88
3.6. Перекисное окисление липидов и состояние мембран при псориазе...89
3.7. Системные нарушения при псориазе 89
3.8. Нервная система и псориаз з
3.9. Цитокины при псориазе 91
3.10. Взаимоотношение между иммунной системой и кератиноцитами при псориазе 102
3.11. Методы лечения псориаза 109
Часть 2. Иммунотропные препараты из кожи. разработка получения, физико-химические и иммунобиологические свойства и перспектива клинического применения (Собственные исследования)
Глава 4. Материалы и методы исследования 115
4.1 .Материалы исследования 115
4.2.Физико-химические методы 115
4.2.1. Определение концентрации белка по методу Лоури 115
4.2.2. Определение концентрации белка биуретовым методом 116
4.2.3. Определения концентрации РНК 116
4.2.4. Определение концентрации углеводов 118
4.2.5. Определение концентрации общих липидов 119
4.2.6. Гель-хроматография 119
4.2.7. Гель-хроматография высокого давления (ВЭЖХ) 121
4.2.8. Высокоэффективная жидкостная хроматография в обращенной фазе 122
4.2.9. Метод изоэлектрофокусирования в тонком слое агарозы 122
4.2.10. Метод вертикального ступенчатого электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия .125
4.2.11. Метод вертикального электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии 7М мочевины 130
4.2.12. Метод масс-спектрометрии 132
4.3. Иммунобиологические методы 133
4.3.1. Определение количества антителообразующих клеток селезенки
мышей на пике первичного иммунного ответа 133
4.3.2. Метод восстановления чувствительности Т-лимфоцитов селезенки тимэктомированных мышей к ингибирующему действию азатиоприна ин витро 134
4.3.3. Метод восстановления чувствительности Т-лимфоцитов селезенки тимэктомированных мышей к ингибирующему действию азатиоприна ин виво 137
4.3.4. Метод определения уровня сывороточной тимической активности 138
4.3.5. Метод получения кератиноцитов человека 140
4.3.6. Пролиферация кератиноцитов человека 141
4.3.7. Дифференцировка кератиноцитов человека 141
4.3.8. Культура эпидермоидных клеток карциномы человека А431... 142
4.3.9. Культура эмбриональных фибробластов человека 143
4.3.10. Определение содержания цитокинов 143
4.3.10.1. Трансформирующий фактор роста-бетаї и бета2 143
4.3.10.2. Интерлейкин-4 144
4.3.10.3. Интерлейкин-1 бета 145
4.3.10.4. Фактор некроза опухолей-альфа 146
4.3.10.5. Эпвдермальный фактор роста 148
4.4. Фармакологические методы 150
4.4.1. Кожно-резорбтивное действие 150
4.4.2. Острая токсичность 150
4.4.3. Хроническая токсичность 152
4.4.4. Анафилактический шок 153
4.4.5. Активная кожная анафилаксия 155
4.5. Статистическая обработка результатов 156
Глава 5. Результаты и их обсуждение 157
5.1 .Разработка ацетонового метода получения иммунотропных препаратов 157
5.1.1. Процентное содержание белка, РНК, углеводов и общих липидов в иммунотропных препаратах 161
5.1.2. Влияние препаратов на количества антителообразующих клеток селезенки мышей на пике первичного иммунного ответа 162
5.1.3. Влияние препаратов на восстановление чувствительности Т-лимфоцитов селезенки тимэктомированных мышей к ингибирующему действию азатиоприна ин витро 165
5.1.4. Гель-хроматография высокого давления иммунотропных препаратов 168
5.1.5. Изоэлектрофокусирование иммунотропных препаратов 169
5.1.6. Электрофорез иммунотропных препаратов в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия 171
5.1.7. Электрофорез иммунотропных препаратов в полиакриламидном геле в 7М мочевине 176
5.1.8. Влияние иммунотропных препаратов на пролиферацию и дифференцировку кератиноцитов человека в первичной культуре.. 180
5.1.9. Определение содержания в иммунотропных препаратах некоторых цитокинов 183
5.1.10. Фармакологические свойства К-активина 186
5.1.11. Лечение больных псориазом К-активином путем наружного применения 193
5.1.12. Обращенно-фазовая высокоэффективная жидкостная хроматография К-активина 196
5.1.13. Масс-спектрометрия К-активина 198
5.1.14. Влияние К-активина на восстановление чувствительности Т-лимфоцитов селезенки тимэктомированных мышей к ингибирующему действию азатиоприна ин виво 201
5.1.15. Влияние К-активина на уровень сывороточной тимической активности 202
5.1.16. Влияние К-активина на пролиферацию эпидермоидных клеток карциномы человека А431 206
5.1.17. Влияние К-активина на пролиферацию эмбриональных фибробластов человека 207
5.1.18. Определение содержания в К-активине некоторых цитокинов...208
5.1.19. Физико-химические и иммунобиологические свойства К-активина 210
5.1.20. Заключение 212
5.2. Разработка метода получения иммунотропных препаратов, включающего этапы высаливания 215
5.2.1. Процентное содержание белка, РНК, углеводов и общих липидов в препаратах 218
5.2.2. Влияние препаратов на количества антителообразующих клеток селезенки мышей на пике первичного иммунного ответа 219
5.2.3. Влияние препаратов на восстановление чувствительности Т-лимфоцитов селезенки тимэктомированных мышей к ингибирующему действию азатиоприна ин витро 220
5.2.4. Изоэлектрофокусирование иммунотропных препаратов 221
5.2.5. Электрофорез иммунотропных препаратов в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия 222
5.2.6. Влияние иммунотропных препаратов на пролиферацию эпидермоидных клеток карциномы человека А431 223
5.2.7. Сравнительная характеристика иммунотропных препаратов, полученных ацетоновым методом и методом, включающим этапы высаливания 224
5.2.8. Заключение 233
5.3. Разработка безацетонового метода получения иммунотропных
препаратов 234
5.3.1. Процентное содержание белка, РНК, углеводов и общих липидов в препаратах 237
5.3.2. Влияние препаратов на количества антителообразующих клеток селезенки мышей на пике первичного иммунного ответа 238
5.3.3. Влияние препаратов на восстановление чувствительности Т-лимфоцитов селезенки тимэктомированных мышей к ингибирующему действию азатиоприна ин витро 239
5.3.4. Изоэлектрофокусирование иммунотропных препаратов 240
5.3.5. Электрофорез иммунотропных препаратов в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия 242
5.3.6. Влияние хранения на физико-химические и иммунологические свойства препаратов, полученных безацетоновым методом 243
5.3.7. Сравнительная характеристика иммунотропных препаратов, выделенных ацетоновым и безацетоновым методами 249
5.3.8. Заключение 258
ГЛАВА 6. Общее заключение 259
Выводы 272
Список литературы
