Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 8
1.1. Сериновые протеазы. Механизм действия сериновых протеаз 8
1.2. Контактный путь активации свертывания 11
1.2.1. Активация фактора XII 11
1.2.2. Физиологическая роль фXII 14
1.2.3. Роль контактной активации в патологии 17
1.3. Ингибиторы контактной активации 18
1.3.1. Плазменные ингибиторы фXIIa 18
1.3.2. Белковые ингибиторы фXIIa неплазменного происхождения 20
1.3.3. Стандартный механизм ингибирования сериновых протеаз 22
1.4. Ингибитор трипсина из кукурузы 26
Постановка задачи 28
ГЛАВА 2. Материалы и методы 30
2.1. Используемые реактивы 30
2.2. Подбор праймеров, полимеразная цепная реакция и сайт-направленный мутагенез 34
2.3. Трансформация клеток штамма-продуцента плазмидными конструкциями 35
2.4. Экспрессия и детекция рекомбинантных ингибиторов 36
2.5. Очистка рекомбинантных ингибиторов 37
2.6. Измерение ингибирующей активности 38
2.7. Подготовка пространственных структур CHFI и его мутантов для проведения докинга 40
2.8. Молекулярная динамика 41
2.9. Подготовка модельной структуры фактора XIIa на основе гомологии з
2.10. Белок-белковый докинг 43
2.11. Статистический анализ 44
ГЛАВА 3. Результаты 45
3.1. Клонирование, экспрессия и очистка рекомбинантного CHFI 45
3.2. Измерение ингибирующей активности 51
3.3. Моделирование взаимодействия протеаза-связывающей петли CHFI с ингибируемыми протеазами 56
3.3.1. Подготовка пространственных структур CHFI и его мутантов для проведения докинга 56
3.3.2. Моделирование структуры фXIIa. Докинг 59
ГЛАВА 4. Обсуждение 67
Выводы 73
Благодарности 74
Список литературы 75q
