Оглавление
ВВЕДЕНИЕ ............................................................................................................. 4
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ...................................................................... 11
1.1 Дисбаланс иммунной системы и способы его восстановления .............. 11
1.2 Клеточные методы терапии аутоиммунных заболеваний ....................... 16
1.2.1 Мезенхимальные стромальные клетки ................................................ 16
1.2.2 Дендритные клетки ................................................................................ 20
1.2.3 Т-регуляторные клетки .......................................................................... 26
1.3 Экспериментальные модели артрита ......................................................... 34
1.4 Заключение ................................................................................................... 39
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ......................... 40
2.1 Объект исследования ................................................................................... 40
2.2 Этическое заключение ................................................................................. 40
2.3 Лабораторные животные ............................................................................. 40
2.4 Получение миелоидных дендритных клеток у мышей ............................ 41
2.5 Схема эксперимента .................................................................................... 41
2.6 Получение ДНК-конструкций, кодирующих IL-10, CCR9 и эпитопы коллагена II типа ................................................................................................ 42
2.7 Трансфекция ................................................................................................. 46
2.8 Оценка продукции IL-10 трансфицированными дендритными клетками .............................................................................................................................. 47
2.9 Со-культивирование лимфоцитов и дендритных клеток ........................ 47
2.10 Пролиферативная активность CD4+-лимфоцитов при со-культивировании с Т-рег ................................................................................... 48
2.11 Анализ миграционной активности ДК in vitro ........................................ 49
2.12 Анализ содержания Т-рег в сочетанной культуре ДК и клеток тимуса .............................................................................................................................. 50
2.13 Проточная цитометрия .............................................................................. 51
2.14 Протокол антиген-коллаген индуцированного артрита ........................ 51
2.15 In vivo исследование .................................................................................. 52
2.16 Оценка влияния трансфицированных ДК на течение экспериментального артрита ............................................................................ 53
2.17 Статистический анализ данных ................................................................ 54
3
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ ............ 55
3.1 Получение толерогенных дендритных клеток .......................................... 55
3.2 Оценка внутриклеточного содержания IL-10 и TGF-β в CD4+-лимфоцитах в совместной культуре ДК и CD4+лимфоцитов ........................ 61
3.3 Пролиферация CD4+спленоцитов в совместной культуре Т-рег, CD4+лимфоцитов и коллагена II типа .............................................................. 62
3.4 Анализ in vitro миграционных возможностей ДК, трансфицированных ДНК-конструкциями CCR9 ............................................................................... 64
3.5 Анализ количества Т-рег в совместной культуре ДК и клеток тимуса .. 65
3.6 Отработка модели антиген-коллаген индуцированного артрита............ 66
3.7 Оценка влияния полученных ДК на течение экспериментального артрита у мышей ................................................................................................ 71
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ ............. 77
ЗАКЛЮЧЕНИЕ ................................................................................................... 85
ВЫВОДЫ .............................................................................................................. 87
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ............................................................................... 89
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ................................................................................. 90
