Введение
CLASS Глава 1. Обзор литературы. Неинвазивная пренатальная диагностика CLASS 11
Плацента. Строение и функции 13
Попытки и методы неинвазивной диагностики 15
Клетки плода 17
Эритробласты 18
Трофобласты 20
Циркулирующие нуклеиновые кислоты 21
Полимеразная цепная реакция (пцр) 23
Общие сведения 23
Пцр в реальном времени 28
Анализ линейных разрушаемых проб (taqman анализ) 29
Пцр с обратной транскрипцией 31
Одностадийная от-пцр 32
Двухстадийная от-пцр 33
Цифровая пцр 33
Полиморфные маркеры 36
Мини-и микросателлиты 36
Полиморфизм длин рестрикционных фрагментов (пдрф) 37
Однонуклеотидный полиморфизм (онп) 38
Пренатальная диагностика сцепленных с полом заболеваний 40
Гемофилия типов а и в 41
Синдром мартина-белл 42
Дистрофия дюшенна 45
Методы пренатальной диагностики пола плода 46
Пренатальная диагностика резус-фактора плода 48
Отрицательный резус-фактор. Клинические аспекты 49
Гены группы rh 50
Применение циркулирующих нуклеиновых кислот для диагностики синдрома дауна 52
Синдром дауна. Клинические, генетические и социальные аспекты 52
Внеклеточные плодные нуклеиновые кислоты в диагностике синдрома дауна. Попытки, подходы и методы 55
Плацентарные мрнк. Попытки и методы. Выбор исследуемых генов и маркеров 58
CLASS Глава 2. Экспериментальная часть. Материалы и методы CLASS 63
Образцы крови и плазмы крови 63
Выделение геномной днк человека методом фенол-хлороформной экстракции 64
Выделение циркулирующей днк из плазмы 65
Выделение циркулирующей рнк из плазмы 65
Обратная транскрипция 66
Параметры и компоненты пцр в реальном времени, а также пцр и от-
Пцр 67
Пороговый цикл 68
Олигонуклеотиды 69
Условия пнр и последовательности праймеров 70
Цифровая пцр 72
Оценка эффективности проведения пнр 73
Генотипирование полиморфных маркеров rs8130833, rs 1155158 и
Rs7354779 74
CLASS Глава 3. Результаты и их обсуждение CLASS 77
Пренатальное определение пола плода 77
Цифровая пцр 77
Амплификация участков днк, содержащих маркер dys14 с целью определения половой принадлежности плода по образцам плазмы крови беременных женщин 79
Пренатальное определение резус-фактора плода 82
Определение предела обнаружения участков гена rhd в реакционной смеси 82
Установление резус-фактора плода по образцам плазмы крови беременных женщин 83
Разработка подхода для диагностики синдрома дауна у плода по образцам плазмы крови беременных женщин 86
Определение количества и качества выделенной рнк 86
Исследование сохранности рнк в крови и плазме крови 86
Отработка оптимального метода выделения циркулирующих мрнк 89
Идентификация генетических маркеров, пригодных для проведения исследования 90
Генотипирование полиморфных маркеров в генах pla с4, с21 orf 105 и dnmt3l 93
Выводы 97
Список литературы 99
Благодарности 113
