ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ ...................................................................................................................... 5
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ .................................................................................. 14
1.1. Бактериальные полисахариды ......................................................................... 14
1.1.1. Бактериальные полисахариды в регуляции иммунитета и воспаления 14
1.1.2. Влияние бактериальных полисахаридов на функционирование
митохондрий и окислительный стресс ................................................................. 15
1.1.3. Антипролиферативные свойства полисахаридов ................................... 17
1.2. КК как бактериальный экзополисахарид ....................................................... 20
1.2.1. История изучения и описания структуры КК ......................................... 20
1.2.2. Регуляция биосинтеза КК .......................................................................... 25
1.2.3. Роль КК в физиологии адаптации бактерий ............................................ 27
1.2.4 Биологическая активность КК в исследованиях на многоклеточных
организмах ............................................................................................................... 30
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ .................................... 32
2.1. Получение КК из бактериальной культуры ..................................................... 32
2.1.1. Условия культивирования ............................................................................ 32
2.1.2. Протокол выделения и очистки КК ............................................................ 33
2.1.3. Описание образцов КК ................................................................................. 36
2.2. Исследование влияния КК на клеточные линии млекопитающих (in vitro) . 36
2.2.1. Клеточные линии .......................................................................................... 36
2.2.2. Оценка жизнеспособности клеточных линий в присутствии КК ............ 37
2.2.3. Оценка влияния КК на морфологию клеток .............................................. 38
2.2.4. Проточная цитометрии для оценки кинетики гибели клеток миоцитов . 39
3
2.2.5. Оценка влияния КК на мембранный потенциал митохондрий и формирование АФК в клетках миоцитов ............................................................. 39
2.3. Исследование эффектов КК на мышах (in vivo) .............................................. 41
2.3.1. Анализ субхронической токсичности КК .................................................. 41
2.3.2. Оценка влияния КК на физическую активность животных в тесте вынужденного плавания ......................................................................................... 42
2.3.3. Просвечивающая электронная микроскопия (ПЭМ) желудочков сердца мыши ........................................................................................................................ 44
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ............................................................................................. 45
3.1. Оптимизация протокола выделения КК ........................................................... 45
3.1.1. Анализ образцов КК, полученных при использовании разных протоколов культивирования и выделения .......................................................... 45
3.1.2. Анализ полученных образцов методом ГХ-МС ........................................ 47
3.1.3. Выводы о применении протоколов выделения и очистки для получения КК ............................................................................................................................. 50
3.2. Исследование биологических эффектов КК in vitro ........................................ 51
3.2.1. Оценка жизнеспособности клеточных линий в присутствии КК ............ 51
3.2.2. Анализ влияния КК на морфологию клеток .............................................. 53
3.2.3. Анализ влияния КК на клеточную гибель в линии миоцитов ................. 56
3.2.4. Анализ количества активных митохондрий и формирования АФК в клеточной линии миоцитов в присутствии КК .................................................... 58
3.2.5. Вывод по анализу эффектов КК in vitro ..................................................... 62
3.3. Исследование влияния КК на организм мышей .............................................. 63
3.3.1. Оценка субхронической токсичности КК .................................................. 63
3.3.2. Изменение массы внутренних органов мышей при получении КК ........ 69
3.3.3. Оценка влияния КК на физическую активность мышей .......................... 74
4
3.3.4. Влияние КК на ультраструктуру миокарда желудочков сердца мыши .. 77
3.3.5. Выводы о влиянии КК на организм мышей ............................................... 80
ЗАКЛЮЧЕНИЕ ............................................................................................................. 82
ВЫВОДЫ ....................................................................................................................... 86
СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ ................................................................... 88
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ ..................................................... 89
