Введение
1. Обзор литературы 9
1.1 .Миелопролиферативные заболевания 9
1.1.1. Хронический миелолейкоз 10
1.1.2. Эритремия 14 1.1.3.Сублейкемический миелоз (миелофиброз) 16
1.2. Гранулы нейтрофилов человека 17
1.2.1. Характеристика и классификация гранул нейтрофилов 18
1.2.1.1. Азурофильные (первичные) гранулы 19
1.2.1.2. Специфические (вторичные) гранулы 22
1.2.1.3. Желатиназные гранулы 23
1.2.1.4. Секреторные везикулы 24
1.2.2. Экзоцитоз гранул нейтрофилов 27
1.3. Гипотеза слипания и слияния мембран (SNARE гипотеза) 28
1.3.1. Характеристика основных белковых компонентов модели 29
1.3.1.1 .Белки семейства VAMP/синаптобревинов 29
1.3.1.2. Синтаксины 31
1.3.1.3. SNAP-25 32
1.3.1.4. NSF 33
1.3.1.5. SNAP 34
1.3.2. Механизм слипания/слияния мембран (SNARE гипотеза) 34
2. Материалы и методы исследований 41
2.1. Объекты исследования 41
2.2. Материалы 41
2.3. Методы 43
2.3.1 Выделение нейтрофилов человека 43
2.3.2. Активация нейтрофилов 44
2.3.3. Определение активности миелопероксидазы 44
2.3.4. Определение активности лизоцима 45
2.3.5. Определение активности щелочной фосфатазы 45
2.3.6. Иммунофлуоресцентная микроскопия 46
2.3.7. Электронная микроскопия 47
2.3.8. Электрофорез белков 48
2.3.9. Иммуноблоттинг (Вестерн-блот анализ) 49
2.3.9.1. Перенос фракций из геля на фильтр 50
2.3.9.2. Иммунное выявление антигенов на фильтре 50
2.3.10. Иммунопреципитация 51
3. Результаты и их обсуждения 53
3.1. Оценка экзоцитоза внутриклеточных гранул нейтрофилов больных миелопролиферативными заболеваниями 53
3.2. Идентификация белков-медиаторов экзоцитоза в лейкоцитах пациентов с миелопролиферативными заболеваниями 73
3.3. Взаимодействие белков группы SNARE в нейтрофилах больных миелопролиферативными заболеваниями 87
Выводы 92
