Введение
Глава 1 Взаимодействие антиген-антитело: экспериментальные методы исследования и теоретические модели 10
1.1. Взаимодействие антиген-антитело 10
1.1.1. «Антиген» и «антитело» 10
1.1.2. Физическая основа взаимодействия антиген-антитело 13
1.1.3. Характерные величины взаимодействия антиген-антитело 15
1.2. Экспериментальные методы исследования взаимодействия антиген-антитело ... 16
1.3. Математические модели взаимодействия антиген-антитело 22
1.3.1. Равновесные модели 22
1.3.2. Кинетические модели связывания антигена с антителом 24
Глава 2. Экспериментальная установка и методика эксперимента 32
2.1. Сканирующий проточный цитометр 32
2.2. Измерение флуоресценции 35
2.2.1. «Перпендикулярная» конфигурация измерения флуоресценции 35
2.2.2. «Параллельная» конфигурация измерения флуоресценции 36
2.2.3. Сравнение перпендикулярной и параллельной конфигураций измерения флуоресценции 37
2.2.4. Процедуры, использованные при измерении флуоресценции 39
2.2.5. Постановка кинетического эксперимента и влияние красителя в растворе 41
2.3. Использование светорассеяния для классификации частиц 42
Глава 3. Кинетические модели связывания лигандов с поверхностными рецепторами клетки и иммуноагтлготинации 46
3.1. Связывание моновалентного лиганда с моновалентным рецептором 46
3.1.1. Формулировка физической модели 46
3.1.2. Кинетическая схема процесса связывания 47
3.1.3. Приближение непрерывной функции распределения 49
3.1.4. Зависимость констант скоростей реакции от количества посадочных мест 50
3.1.5. Кинетический предел 51
3.1.6. Диффузионный предел 54
3.1.7. Распределение клеток по количеству занятых рецепторов 54
3.1.8. Необратимое связывание лиганда 55
3.1.9. Обсуждение результатов 56
3.1. Кинетическая модель начальной стадии иммуноагглютинации 58
Глава 4. Экспериментальные кинетики образования комплексов антиген антитело: иммунофлуоресценция и иммуноагглютннация 64
4.1. Кинетика связывания флуоресцентно меченых антител с поверхностными рецепторами гибридомных клеток 64
4.1.1. Постановка экспериментов 64
4.1.2. Экспериментальные сигналы 68
4.1.3. Экспериментальные результаты и их обсуждение 70
4.2. Исследование кинетики начальных стадий агглютинации 76
4.2.1. Возможность использования СПЦ для исследования ранних стадий агглютинации 77
4.2.2 Экспериментальные кинетики образования димеров на начальной стадии агглютинации 85
Заключение 91
Приложение 95
