Введение
ГЛАВА 1. Гликозидгидррлазы
1.1 Современная классификация гликозидгидролаз 16
1.2 Каталитические механизмы действия гликозидгидролаз 17
1.3 Гликозидгидролазы 27 семейства, а-галактозидазы 21
1.4 Р-Галактозидазы 24
ГЛАВА 2. Методы рентгено структурного анализа макромолекул
2.1 Кристаллизация белка 26
2.2 Синхротронное рентгеновское излучение 31
2.3 Приборы и методы сбора данных в кристаллографии макромолекул 34
2.4 Методы решения фазовой проблемы для макромолекул 39
2.5 Недостатки метода изоморфного замещения: метод быстрой криодериватизации 46
2.6 Краткий обзор компьютерных программ, применяемых в работе 47
ГЛАВА 3. Объекты и методы исследования
3.1 Очистка и кристаллизация а-галактозидазы из мицелярного гриба Trichoderma reesei 51
3.2 Окислительная активация а-галактозидазы 54
3.3 Очистка и кристаллизация р-галактозидазы из гриба Penicillium sp 55
3.4 Получение тяжелоатомных производных кристаллов белков и сбор дифракционных данных 57
3.5 Решение фазовой проблемы и построение кристаллографической модели а-галактозидазы и ее комплекса с D-галактозой 60
3.6 Решение структуры Р-галактозидазы и ее комплекса с D-галактозой 68
ГЛАВА 4. Кристаллографические модели и механизм действия изучаемых ферментов
4.1 Качество модели и описание структуры а-галактозидазы из T.reesei 71
4.2 Сравнение структур а-галактозидазы и других гликозидгидролаз 76
4.3 Связывание ингибитора и строение активного центра а-галактозидазы ..77
4.4 Каталитический механизм действия а-галактозидазы из T.reesei 82
4.5 Описание структуры Р-галактозидазы из Penicillium sp 87
4.6 Сравнение структур Р-галактозидаз из Penicillium sp., Е.coli и Т.thermophilus 93
4.7 Активный центр Р-галактозидазы 96
Заключение 98
Список литературы 103
