Введение
Глава I. Взаимосвязь иммунной и нервной систем 7
1.1. Взаимная регуляция иммунной и нервной систем 7
1.1.1. Нервная регуляция иммунной системы 8
1.1.2. Иммунная регуляция нервной системы 9
1.1.3. Нейровоспаление 10
1.2 Глутамат в иммунной системе 12
II. Распространение и функции глутаматных рецепторов в организме 15
II. 1. Глутаматные рецепторы в мозге 15
II.1.1. Классификация глутаматных рецепторов 15
II.1.2. Взаимодействие глутаматных рецепторов разных классов 16
II.1.3. Экзайтотксичность 17
II.2. Глутаматные рецепторы в периферических тканях и органах 18
II.3. Глутаматные рецепторы при неопластических процессах 20
II.4. Глутаматные рецепторы лимфоцитов 23
III. NMDA-рецептор: структура и функции 27
III.1. Структура NMDA-рецептора: субъединичный состав и лигандная специфичность 27
III.2.Регуляция функционирования рецепторов 29
III.2.1. Десенсибилизация 30
III.2.2. Фосфорилирование 31
III.2.3. Встраивание в мембрану и формирование функционально активного рецепторного комплекса 34
IV. Механизмы клеточной активации 37
IV.1. Общие представления о механизмах клеточной активации 37
IV.2. АФК и их участие в механизмах сигнальной трансдукции 38
IV.2.1. АФК, источники их образования в организме, система антиоксидантной защиты 38
IV.2.2. Биологическая роль АФК и участие в сигнальной трансдукции 40
IV.3. Активация лимфоцитов 44
IV.3.1 Роль кальция в активации лимфоцитов 45
IV.3.2. УчастиеАФКв активации лимфоцитов.. 47
IV.4. NMDA-рецептор и механизмы внутриклеточной сигнализации 48
Цель и задачи исследования 55
Научная новизна и практическая ценность работы 55
Положения, выносимые на защиту 56
I. Материалы и методы исследования 57
1.1. Получение клеточных препаратов 57
1.1.1. Получение ткани мозжечка крыс и выделение гранулярных клеток 57
1.1.2. Отбор крови 57
1.1.3 Выделение лимфоцитов 58
1.1.4. Первичная культура периферических лимфоцитов 58
1.2. Определение уровня свободных радикалов хемилюминесцентным методом 58
1.3. Проточная цитометрия 60
1.3.1. Принцип метода проточной цитометрии 60
1.3.2.Определение внутриклеточного уровня АФК. 61
1.3.3.Определение доли мертвых клеток 63
1.3.4.Определение доли апоптотических клеток 63
1.3.5.Иммунофенотипирование 64
1.3.6.Определение экспрессии NRl-субъединицы 65
1.4. Определение экспрессии гена GRIN1 66
1.4.1. Дизайн праймеров для полимеразной цепной реакции 66
1.4.2. Выделение РНК и обратная транскрипция 66
1.4.3. Полимеразная цепная реакция 67
1.5. Статистическая обработка данных 67
II. Результаты исследования и их обсуждение 68
II.1. Влияние NMDA на хемилюминесценцию суспензии лимфоцитов периферической крови человека 68
II.2. Исследование действия NMDA на функциональное состояние лимфоцитов методом проточной цитометрии 72
II.3. Определение экспрессии мРНК к NR1 субъединице NMDA-рецепторного комплекса 78
II.4. Определение экспрессии субъединицы NR1 NMDA-рецепторного комплекса на поверхности лимфоцитов 81
II.4.1. Окраска клеток поликлональными антителами (ab6483) KNRI-субъединице 81
II.4.2. Окраска клеток моноклональными антителами (GTX30182) KNRJ- субъединице 82
II.4.3. Изменение экспрессии NR1 в результате инкубации клеток с NMDA 83
Заключение 87
Выводы 89
Благодарности 90
Список литературы 91
