Введение
Глава I. Нуклеиновые кислоты биологических жидкостей 12
1.1. Нуклеиновые кислоты сыворотки крови в норме и при различных патологиях .12
1.2. Нуклеиновые кислоты асцитной и синовиальной жидкости 23
1.3. Нуклеиновые кислоты,выделяющиеся в культура-льную среду при выращивании клеток 26
1.4. Гипотезы о функциональном значении внеклеточных нуклеиновых кислот 37
Собственные исследования .41
Глава 2. Материал и методы исследования 41
2.1. Анализируемый материал 41
2.2. Выделение нуклеиновых кислот из тканей 42
2.2.1. Получение ДНК из ткани печени крыс 42
2.2.2. Получение тотальных ГНК из гепатомы Зайде ла крыс 43
2.3. Выделение нуклеиновых кислот из биологических жидкостей 44
2.3.1. Получение нуклеиновых кислот из асцитной жидкости опухолевого происхождения 44
2.3.2. Получение нуклеиновых кислот из сыворотки крови 43
2.4. Определение дезоксирибози ДНК по методу Бар-тона 46
2.5. Определение рибозы РНК орциновым методом 46
2.6. Ультрацентрифугирование в градиенте плотности CsCl 47
2.7. Определение устойчивости высокомолекулярных нуклеиновых кислот сыворотки крови к действию ферментов 48
2.7.1. Обработка препаратов нуклеиновых кислот сыворотки крови ДНКазой 48
2.7.2. Обработка препаратов РНКазой 48
2.7.3. Обработка препаратов нуклеиновых кислот проназой 48
2.7.4. Определение устойчивости высокомолекулярных нуклеиновых кислот сыворотки крови к действию фосфодиэстеразы 49
2.7.5. Определение чувствительности нуклеиновых кислот сыворотки крови к щелочному гидролизу 49
2.8. Аналитический электрофорез в ном ПАХ 49
2.9. Окраска электрофореграмм "stain all", 51
2.10. Аналитический электрофорез в агарозе 51
2.11. Выделение высокомолекулярных ДНК из Одного агарозного геля методом электроэлюции 53
2.12. Рестрикционный анализ высокомолекулярных ДНК биологических жидкостей 53
2.13. Спиртовая хроматография препарата нуклеиновых кислот 54
2.14. Метод ник-трансляции высокополимерных ДНК с использованием 32pdH 55
2.15. Гибридизация высокомолекулярных ДНК сыворотки крови крыс при большом избытке клеточной ДНК в растворе
2.16. Гибридизация нуклеиновых кислот по методу Саузерна (блот-гибридизация) 57
2.17. Определение формы высокомолекулярной ДНК сыворотки крови с помощью электронной микроскопии (Miller et al.,1978) 59
2.18. Методы очистки некоторых реактивов 59
2.18.1. Очистка этанола . .59
2.18.2. Очистка хлороформа 59
2.18.3. Перекристаллизация акриламида .59
2.18.4. Перекристаллизация бисакриламида
2.19. Реактивы,использовавшиеся в работе 61
Глава 3. Результаты собственных исследований 62
3.1. Нуклеиновые кислоты сыворотки крови здоровых крыс 62
3.1.1. Особенности нуклеиновых кислот сыворотки крови крыс по данным спектрофотометрии 3.1.2. Оценка величины потери нуклеиновых кислот в процессе выделения из сыворотки крови 65
3.1.3. Соотношение ДНК и РНК в сыворотке крови крыс 66
3.1.4. Фракционный состав нуклеиновых кислот сыворотки крови 67
3.1.5. Одноцепочечная структура РНК сыворотки крови 78
3.1.6. Осаждаемостъ РНК сыворотки крови при центрифугировании в градиенте плотности CsCi. 78
3.1.7. Генетическая уникальность наиболее высокомолекулярных ДНК (17 и 20 МД) сыворотки крови крыс 81
3.1.8. Фрагментация 20 и 17 МД ЩК сыворотки крови крыс реотриктазой Kpn I 84
3.1.9. Электронно-микроскопическое выявление вы-сокополимерной ДНК в сыворотке крови крыс 84
3.2. Нуклеиновые кислоты сыворотки крови крыс с опухолями 89
3.2.1. Спектрофотометрические особенности нуклеиновых кислот сыворотки крови крыс с ге-патомой Зайдела 89
3.2.2. Изменение соотношения отдельных фракций высокополимерных ДНК в сыворотке крови крыс с гепатомой Зайдела и в асцитной жидкости 90
3.2.3. Стабильность спектра низкомолекулярных РНК сыворотки крови при гепатоме Зайдела 93
3.2.4. Спектр низкомолекулярных нуклеиновых кислот асцитной жидкости гепатомы Зайдела 97
3.2.5. Сходство и отличия спектра нуклеиновых кислот асцитной жидкости у онкологических больных и экспериментальных животных с гепатомой Зайдела 98
Обсуадение результатов . 105
Выводы 116
Список литературы 118
