Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 11
1.1. Белки теплового шока. Открытие семейства 11
1.2. Характеристика семейства белков теплового шока 11
1.3. Индукция синтеза белков теплового шока 13
1.4. Структура основных белков теплового шока 16
1.5. Функции белков теплового шока : 20
1.6. Особенности биологических активностей белков теплового шока в
опухолевой и неопухолевой клетках 21
1.7. Участие белков теплового шока в регуляции иммунного ответа 26
1.7.1. Стимуляция HSP неспецифического иммунного ответа 26
1.7.2. Стимуляция HSP специфического иммунного ответа 28
1.8. Методы лечения онкологических заболеваний 31
1.8.1. Основные виды противоопухолевых вакцин 33
1.9. Белки теплового шока как объекты , для иммунотерапии онкологических заболеваний 35
1.10. Использование вакцин на основе белков теплового шока в клинической практике . 39
Заключение 40
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 43
2.1. Забор биологических образцов 43
2.2. Перевивка опухоли 43
2.3. Выделение и очистка белков теплового шока 43
2.4. Дот-блот 44
2.5. Электрофорез в полиакриламидном геле в денатурирующих условиях 45
2.6. Вестерн-блот 45
2.7. Иммуноферментный анализ
2.8. Определение цитотоксической активности полученных фракций .47
2.9. Определение стимуляции синтеза ДНК 2.10. Определение содержания эндотоксина 49
2.11. Определение неспецифического иммунного ответа на аутологичные белки теплового шока в клетках моноцитарно-макрофагального ряда 49
2.12. Иммуногистохимическое исследование 50
2.13. Экспериментальное лечение животных 51
2.14. Оценка эффективности противоопухолевой терапии 54
2.15. Измерение размера опухоли 54
2.16. Гистологическое исследование 54
2.17. Окрашивание гематоксилин-эозином 55
2.18. Статистика 55
Глава 3. Результаты исследования и их обсуждение 56
3.1. Выделение и очистка белков теплового шока 56
3.1.1. Определение условий гомогенизирования 57
3.1.2. Определение условий осаждения белков теплового шока 57
3.1.3. Определение условий хроматографирования 60
3.1.4. Оценка степени очистки фракций, обогащенных белками теплового шока 63
3.1.5. Выбор условий ингибирования протеолитической деградации
белков 65
3.1.6. Концентрирование фракций, содержащих белки теплового шока, после хроматографии на гепарин-сефарозе 68
3.1.7. Определение содержания эндотоксина в выделенном препарате белков теплового шока 72
3.1.8. Количественное определение содержания белков теплового шока 72
3.2. Анализ цитотоксической активности и стимуляции синтеза ДНК in vitro
3.3. Определение неспецифического иммунного ответа на аутологичные белки теплового шока в клетках моноцитарно-макрофагального ряда 75
3.4. Влияние радиотерапии на продукцию белков теплового шока в опухоли молочной железы 81
3.5. Исследование противоопухолевой активности in vivo
3.5.1. Выбор опухолевой линии и организация работы с экспериментальными животными 83
3.5.2. Использовавшиеся показатели оценки противоопухолевой активности
3.5.3. Изучение динамики роста опухоли 85
3.5.4. Изучение динамики смертности экспериментальных животных...90
3.5.5. Гистологическое исследование 92
3.5.6. Дополнительные показатели эффективности противоопухолевого лечения 101
Заключение 104
Выводы 108
Благодарности 109
Список литературы
