Введение
2. Литературный обзор. структура и механизм действия пороформирующих токсинов белковой природы 11
2.1. Мишени действия мембраноактивных белков и пептидов 11
2.2. Классификация пороформирующих токсинов (ПФТ) 11
2.3. Основные ступени порообразования 13
2.4. а-Пороформирующие токсины 15
2.4.1. Колицины бактерии Escherichia coli 15
2.4.2. Апоптотические белки Вах и Bcl-xL семейства Вс1-2 белков, ключевых регуляторов апоптоза : 19
2.4.3. Дифтерийный токсин (ДТ) из Corynebacterium diphtheriae 22
2.4.3.1. Некоторые биохимические аспекты действия ДТ 22
2.4.3.2. Основа структурно-функциональных взаимосвязей ДТ 23
2.4.4. Актинопорины - высокомолекулярные цитолизины актиний П-й группы 25
2.4.4.1. Классификация цитолизинов актиний 25
2.4.4.2. Первичная структура актинопоринов 26
2.4.4.3. Вторичная и третичная структуры актинопоринов 29
2.4.4.4. Исследование конформационного состояния актинопоринов 32
2.4.4.5. Взаимодействие актинопоринов с липидными компонентами мембран 33
2.4.4.6. Исследование механизма олигомеризации актинопоринов 34
2.4.4.7. Исследование взаимодействия актинопоринов с мембранным интерфейсом, фосфохолиновый сайт связывания 36
2.4.4.8. Молекулярный механизм порообразования 38
2.5. р-Пороформирующие токсины 40
2.5.1. Стафилококковый а-гемолизин из Staphylococcus aureus 40
2.5.2. Холестеринзависимые цитолизины (ХЗЦ) грамположительных бактерий...43
2.5.2.1. Перфринголизин О из Clostridium perfringens и родственные ХЗЦ 44
2.5.2.2. Сайт связывания ХЗЦ с мембранным холестерином 45
2.5.2.3. Механизм мембранолитического действия ХЗЦ 46
2.5.2.4. Влияние холестерина на олигомеризацию и литическую активность ХЗЦ 48
2.5.2.5. Биохимические эффекты ХЗЦ 49
2.5.3. Гидрализины - новая группа 0-ПФТ гидр семейства Cnidaria 49
2.6. Пороформирующие антимикробные пептиды 51
2.6.1. Биологическая роль и классификация 51
2.6.2. Механизм мембранотропного действия 54
2.6.3. Дермасептины 56
2.6.4. Мелиттин 59
2.6.5. Аламетицин 59
2.7. Некоторые аспекты молекулярной организации и функционирования цитоплазматических мембран, определяющие механизм действия мембраноактивных белков и пептидов 60
2.7.1. Структурная организация бислоя и функциональная роль липидных микродоменов 60
2.7.2. Модуляция изменений цитоскелета клеток-мишеней бактериальными патогенами 62
2.7.3. Сравнительная характеристика структурных особенностей водорастворимых мембраноактивных белков и пептидов и мембранных белков цитоплазматических мембран 63
2.7.4. Локализация и роль остатков ароматических аминокислот в связывании с мембранным интерфейсом 66
2.7.5. Движущие силы фолдинга мембраноактивных пептидов и белков, взаимодействующих с мембраной 67
2.8. Перспективы исследования ПФТ и антимикробных пептидов 68
2.9. Заключение 69
3. Обсуждение результатов 71
3.1. Введение 71
3.2. Поиск цитолизинов в актиниях тропических и дальневосточных морей 73
3.3. Выделение и очистка цитолизинов актиний 76
3.3.1. Высокомолекулярные Radianthus цитолизины (II группа) 76
3.3.2. Низкомолекулярные Radianthus цитолизины (I группа) 81
3.3.3. Высокомолекулярные Oulactis цитолизины (II группа) 90
3.3.4. Высокомолекулярный Metridiurri цитолизин (IV группа) 94
3.4. Физико-химические свойства, липидная специфичность и биологическая активность цитолизинов актиний 95
3.4.1. Высокомолекулярные Radianthus цитолизины 95
3.4.2. Низкомолекулярные Radianthus цитолизины Rml и Rmll 103
3.4.3. Высокомолекулярные Oulactis цитолизины 106
3.4.4. Высокомолекулярный Metridium цитолизин 108
3.5. Исследование мембранолитического действия цитолизинов на модельные мембраны 111
3.5.1. Влияние Radianthus цитолизина RTX-A и Metridium цитолизина на проницаемость липосом 111
3.5.2. Порообразующее действие Radianthus, Oulactis, Metridium
цитолизинов на бислойные липидные мембраны (БЛМ) 123
3.5.2.1. Высокомолекулярные Radianthus цитолизины 123
3.5.2.2. Высокомолекулярные Oulactis цитолизины 138
3.5.2.3. Низкомолекулярный Radianthus цитолизин Rmll 140
3.5.2.4. Метридиолизин из Metridium senile 142
3.6. Исследование мембранолитического действия цитолизинов на биологические мембраны 147
3.6.1. Действие цитолизинов П-й, 1-й и IV-й групп на эритроциты млекопитающих 147
3.6.2. Действие Radianthus цитолизина RTX-A на яйцеклетки морского ежа Strongylocentrotus intermedins 152
3.6.3. Изучение проводимости изолированного фрагмента эритроцитарной мембраны, индуцированной цитолизином RTX-A 153
3.6.4. Влияние цитолизина RTX-S II на развитие ооцитов морского ежа Strongylocentrotus intermedins 157
3.7. Исследование жпидной специфичности и липид-белкового взаимодействия Radianthus цитолизинов методом дифференциальной сканирующей калориметрии 158
3.8. Установление первичной структуры Radianthus и Oulactis цитолизинов 171
3.8.1. Определение частичной аминокислотной последовательности Oulactis цитолизинов Ог-А и Or-G и Radianthus цитолизинов RTX-A, RTX-SII и Rmll методами структурной химии белка 171
3.8.2. Установление полной аминокислотной последовательности Ог-А и Or-G... 174
3.8.3. Установление полной аминокислотной последовательности RTX-A 181
3.8.4. Установление полной аминокислотной последовательности RTX-S II 185
3.9. Исследование вторичной структуры и конформационной стабильности актинопорина RTX-S II 189
3.9.1. Пространственная организация нативного актинопорина RTX-S II ..189
3.9.2. Влияние различных факторов на конформацию актинопорина RTX-S П...191
3.9.3. Влияние температуры, величины рН и ионной силы раствора на гемолитическую активность RTX-S II 200
3.10. Анализ структурно-функциональных взаимосвязей Radianthus и Oulactis актинопоринов 203
3.11. Radianthus актинопорины как инструмент количественного
определения сфингомиелина в биологических жидкостях и тканях 213
3.12. Заключение 214
4. Экспериментальная часть 215
5. Выводы 233
6. Список цитируемой литературы
