Введение
Глава 1. Обзор литературы 16
1.1 Современные исследования транспорта гомоцистеина в крови в условиях оксидативного стресса, характерного для гипергомоцистеинемии 19
1.2. Исследование эндотоксического действия гомоцистеина 26
1.3. Основные сведения о современных методах определения гомоцистеина 27
Глава 2. Методы исследования 30
2.1. Объекты исследования 30
2.2. Методы анализа гомоцистеина 30
2.2.1. Метод ВЭЖХ - анализа гомоцистеина со спектрофотометрическим детектированием
2.2.2. Количественное определение соотношения общего и восстановленной формы Гци в плазме крови пациентов с различной патологией 38
2.3. Методы биохимического мониторинга эффектов повышения концентрации гомоцистеина 41
2.3.1. Определение ТБК - активных продуктов, включая малоновый диальдегид в плазме крови 41
2.3.2. Определение SH - групп 45
2.4. Моделирование акселерации токсических эффектов на фоне гипергомоцистеинемии различного уровня введением экспериментальным крысам гомоцистина и его смеси с аргинином 46
2.5. Получение очищенных препаратов и анализ содержания альфа-2-макроглобулина 48
2.5.1. Количественное определение альфа-2-макроглобулина 48
2.5.2. Очистка альфа-2-макроглобулина и приготовление образцов, активированных трипсином. 49
2.6. Изучение распределения гомоцистеина во фракциях плазмы крови здоровых доноров и у пациентов с различной степенью гипергомоцистеинемии методом гель - фильтрации 52
2.7.Изучение гидрофобной сорбции гомоцистеина крупно - молекулярными фракциями плазмы крови 52
2.8. Изучение связывания гомоцистеина очищенными препаратами альфа-2-макроглобулина, активированными и неактивированными трипсином. 53
2.9. Вспомогательные общепринятые методики
3.0. Математический анализ и статистическая обработка полученных данных 54
Глава 3. Результаты исследований и их обсуждение 55
Изучение свойств аминотиолов и их производных. 56
3.1. Абсорбционные спектры производных аминотиолов 56
3.2. Оптимизация высвобождения гомоцистеина из дисульфидных форм 58
3.3. Усовершенствование процедуры калибровки анализа 62
3.4. Селективность анализа гомоцистеина по отношению к глутатиону при использовании колонок с обращенно - фазными сорбентами типа С8 и С18 66
3.5. Серийный анализ плазмы крови 79
3.6. Исследование эндотоксического действия гомоцистина (окисленного гомоцистеина) при состояниях оксидативного стресса 83
3.6.1. Моделирование акселерации токсических эффектов на фоне гипергомоцистеинемии различного уровня введением экспериментальным крысам гомоцистина и смеси гомоцистина с аргинином
3.6.2. Измерение уровня тиоловых групп и продукта перекисного окисления липидов - малонового альдегида у пациентов с гипергомоцистеинемиями
3.7. Определение соотношения общего гомоцистеина и его восстановленной формы в образцах плазмы крови больных 93
3.8. Изучение связывания гомоцистеина активированным альфа-2-макроглобулином 98
3.8.1. Изучение распределения гомоцистеина при гель - фильтрации плазмы крови у здоровых доноров и у пациентов с различной степенью гипергомоцистеинемии 98
3.8.2. Изучение гидрофобной сорбции гомоцистеина крупномолекулярными фракциями плазмы крови
3.8.3. Изучение связывания гомоцистеина очищенными препаратами альфа-2-макроглобулина, активированными и неактивированными трипсином
Заключение 110
Выводы 113
Литература 114
