Введение
Глава 1. Обзор литературы 12
1.1. Стресс как состояние организма 12
1.2. Гипоксия и гиперкапния как стрессовые состояния 13
1.3. pH внутренних сред организма гидробионтов 15
1.4. Общая характеристика полиэлектролитных микрокапсул 17
1.5. Воздействие полиэлектролитных микрокапсул на организм 20
1.6. Биохимические маркеры стрессовых состояний гидробионтов 22
1.6.1. Глутатион-S-трансфераза 22
1.6.2. Лактат 24
1.6.3. Белки теплового шока 24
1.7. Иммунная система гидробионтов 25
1.7.1. Иммунная система ракообразных 25
1.7.2. Иммунная система рыб 28
1.8. Эффект Доннана и полупроницаемые микрокапсулы 30
Глава 2. Материалы и методы 33
2.1. Объекты исследования 33
2.2. Содержание объектов исследования 35
2.3. Проведение гиперкапнических экспозиций 37
2.4. Подготовка микрокапсул 37
2.5. Инъекции микрокапсул 40
2.6. Иммобилизация объектов исследования 41
2.7. Визуализация микрокапсул и получение спектрального сигнала 42
2.8. Измерение pH с помощью микроинкапсулированного SNARF-1 43
2.9. Оценка предельного воздействия эффекта Доннана на концентрации ионов внутри микрокапсул 46
2.10. Оценка заживления инъекционной раны у амфипод 48
2.11. Измерение активности глутатион-S-трансферазы 48
2.12. Определение концентрации белка по методу Бредфорд 49
2.13. Измерение концентрации лактата 50
2.14. Определение содержания БТШ70 51
2.15. Статистическая обработка полученных данных 53
Глава 3. Результаты и обсуждение 54
3.1. Оптические характеристики покровов амфипод E. verrucosus и рыб D. rerio 54
3.2. Распространение микрокапсул в организме гидробионтов 58
3.2.1. Распространение микрокапсул в организме амфипод E. verrucosus 59
3.2.2. Распространение микрокапсул в кровеносной системе рыб D. rerio 62
3.2.3. Распространение микрокапсул после внутримышечной инъекции в рыб D. rerio 68
3.3. Реакция организма гидробионтов на введение микрокапсул 71
3.3.1. Выживаемость амфипод E. verrucosus и рыб D. rerio после введения микрокапсул 72
3.3.2. Реакция биохимических маркеров стрессового ответа амфипод E. verrucosus на введение микрокапсул 74
3.3.3. Восстановление покровов амфипод E. verrucosus после инъекции 77
3.4. Влияние эффекта Доннана на показания микроинкапсулированных флуоресцентных сенсоров 79
3.5. Калибровка микроинкапсулированного pH-чувствительного молекулярного сенсора SNARF-1 84
3.6. Отслеживание pH в организме гидробионтов с помощью имплантированных микрокапсул со SNARF-1 in vivo 87
3.6.1. Долговременная динамика показаний микроинкапсулированного SNARF-1 в кровеносной системе амфипод E. verrucosus и рыб D. rerio 87
3.6.2. Мониторинг изменений pH в кровеносной системе амфипод E. verrucosus и рыб D. rerio в гиперкапнических условиях крови с помощью микроинкапсулированного SNARF-1 89
3.6.3. Параллельный мониторинг pH крови и межклеточной жидкости рыб D. rerio в гипоксических условиях с помощью микроинкапсулированного SNARF-1 91
3.7. Оценка чувствительности содержания лактата у амфипод к гиперкапническим условиям 93
3.8. Обсуждение и заключение 94
Выводы 97
Список используемых сокращений 98
Список литературы 99
